基本信息：

细胞概述

- 定义：小鼠原代肾足突细胞是从小鼠组织中分离得到的，未经传代培养或仅经过少数几次传代的细胞，保持了细胞在体内的原始特性。
- 来源：主要来自小鼠的肾组织，通常选取2-3月龄、体重18-22g的BALB/c小鼠等合适品系的小鼠作为细胞供体。
- 重要性：足细胞连同肾小球基底膜和皮一起构成了肾小球血液滤过屏障，对于维持机体正常的功能和内环境稳定至关重要。

细胞特性

- 形态特征：呈星型多突状，胞体较大，由胞体伸出许多突起，又称足突，呈指状交叉覆盖于肾小球基底膜外表面。
- 生长特性：属于贴壁生长的细胞，需要附着在合适的基质表面才能生长和增殖。
- 功能特性：正常情况下可分泌肾小球基底膜的主要组成成分，如IV型胶原和纤维连接蛋白；在促肾纤维化等刺激下，能分泌具有降解肾小球基底膜作用的基质金属蛋白酶和组织蛋白酶，参与肾小球基底膜的代谢平衡。

分离与培养

- 分离方法：常用机械研磨过不同孔径不锈钢网筛结合胶原酶消化法，或单纯酶解法。先将小鼠处死，取出，剪取肾皮质部，经研磨、过滤、消化等步骤，获得肾小球，再进一步处理得到肾足突细胞。
- 培养条件：一般使用F-12等培养基，添加5%马血清、2.5%胎牛血清、胰岛素、氢化可的松、转铁蛋白等成分，在37℃、5%CO?的培养箱中培养。

鉴定方法

- 形态学观察：通过光学显微镜或电子显微镜观察细胞的形态特征，如星型多突状、足突的指状交叉等。
- 免疫学鉴定：采用免疫荧光或免疫组化方法，检测细胞特异性标记物，如Podocin、WT-1等，若呈阳性则表明为肾足突细胞。

产品名称 小鼠肾足突细胞
组织来源 肾组织
产品规格 5×10^5Cells/T25
方法简介 公司实验室分离的小鼠肾足突采用机械研磨过不同孔径不锈钢网筛结合胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的小鼠肾足突经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

该细胞只可用于科研。出现以下情况不予以重发：客户造成细胞污染；客户不正确操作致细胞状态不好；细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片；细胞培养时经其它处理；细胞收到2天内，未告知相关情况。
公司出售的产品：

传代步骤：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1 - 2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin - 0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1 - 2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
按6 - 8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1 - 2mL培养液后吹匀。
将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
复苏步骤：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1 - 2mL培养基后吹匀。换液并检查细胞密度。
冻存步骤：
以T25瓶为例：
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1 - 2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
1000RPM离心5分钟去掉上清，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。
将冻存管置于程序降温盒中，放入 - 80℃冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存，记录冻存管位置以便下次拿取。