本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
使用方法：
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

8910PM细胞，人细胞 小鼠细胞,EMT6细胞 肾小管上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)十六烷500毫克2～8℃

Dami(人巨核细胞细胞) 5×106cells/瓶×2十八烷基基化铵 Trimethyloctadecylammonium chloride,≥... 112-03-8 1G 通用试剂

HTEpC Pellet 人类气管上皮细胞团块 > 1 mio.cells 人骨骼肌细胞cDNAHSkMC cDNA异麦芽三糖 ISOMcLTOTRIOSq 3371-20-4

CL-0066COLO 205(人细胞)5×106cells/瓶×2potewwiumcaonaTEANxy7noUS碳酸钾,无水ACS级白色颗粒粉末RTsigma

FCGR2B Others Human 人 CD32b / FCGR2B CHO细胞裂解液 (阳性对照) 101-80-44，4-二基二本4,4'-Oxydianiline
大鼠*基质细胞完全培养基 100mL丙硫异烟胺质量规格：>98.5%,BRProthionamide

BV-2小鼠小胶质细胞 Microglial cells of BV-2 mice 1640+20%FBS丙硫异烟胺(标准品)质量规格：>98%,标准品Prothionamide

EREG Protein Human 重组 Epiregulin / EREG 蛋白 (Fc 标签)硬脂酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质)质量规格：>99.5%(GC),标准物质Methyl Stearate

VE(内皮细胞) 5×106cells/瓶×2 胰岛β细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)亚麻酸甲酯(>98.0%(GC),标准物质)质量规格：>98.0%(GC),标准物质Methyl Linolenate

大鼠嗜碱性粒细胞性细胞;RBL-2H3亚油酸甲酯(>99.0%(GC)，标准物质)质量规格：>99.0%(GC)，标准物质Methyl Linoleate
小鼠单核巨噬细胞;J774A.1氯化锶六水Strontium chloride, hexhydrate质量规格：AR,≥99%

tTA基因修饰的小鼠(B类);F9-CAG-tTA-1A3 IV型胶原酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL硫酸钙二水Calcium sulfate, dihydrate质量规格：>99%,AR

AGS胃腺癌细胞 Human2'-脱氧胞苷'-5'-1酸(dCMP)dCMP, 2'-Deoxycytidine 5'-monophosphate, free acid质量规格：>98%,分子生物学级

TNFRSF1B Others Mouse 小鼠 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 细胞裂解液 (阳性对照) DSS(分子生物学级)DSS质量规格：分子生物学级

*成纤维细胞-心房HCF-aa腺苷脱氨酶(15U/mg)Adenosine deaminase from calf spleen 15U/mg质量规格：15U/mg,进口
人脉络丛成纤维细胞总RNAHCPF NA丁二酸二甲酯(>99%,BR)Dimethyl succinate质量规格：>99%,BR

CD83 Others Mouse 小鼠 CD83 / HB15 人细胞裂解液 (阳性对照) 二甲基甲酮钠盐(>97%,BR)Dimethylglyoxime  salt质量规格：>97%,BR

U87MG 人恶性胶质母细胞瘤细胞直接蓝71(≥50%,BR)Direct blue 71质量规格：≥50%,BR

CL-0307SW1116(人腺癌细胞)5×106cells/瓶×2天狼猩红Direct red 80质量规格：BS

RSC, 大鼠雪旺细胞DL-苯甘氨酸(>98%，BC)DL-alpha-Phenylglycine质量规格：>98%，BC

实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
霍山石斛PCR试剂盒主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR