PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：病毒PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

cis-Octahydro-isoindole  中文名：  分子式：C8H15N  度：98.0%  小鼠16α羟基雌1(16-αOHE-1)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装        

2-Benzylsuccinic acid  中文名：  分子式：C11H12O4  度：98.0%  小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid  中文名：  分子式：C17H23NO5  度：98.0%  小鼠11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Atorvastatin calcium  中文名：阿托伐他汀钙  分子式：C33H35FN2O5  度：98.0%  小鼠1,4,5-三0酸肌醇（IP3）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

(2R,3S)-3-Phenylisoserine ethyl ester  中文名：  分子式：C11H15NO3  度：98.0%  小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
小鼠β甘露糖苷酶elisa试剂盒   小鼠β甘露糖苷酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠β甘露糖苷酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（分装），产品别名：小鼠β甘露糖苷酶试剂盒、小鼠β甘露糖苷酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     Ketoprofen  22071-15-4  中文名：酮基布洛芬  分子式：C16H14O3 

小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Bisoprolol fumarate  中文名：富马酸比索洛尔  分子式：C22H35NO8  度：98.0%

小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Bis(4-hydroxy-3,5-dimethylphenyl) sulfone  中文名：双(4-羟基-3,5-二甲苯基)砜  分子式：C16H18O4S  度：98.0%

小鼠β酚(β-Nph)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N-(2-methyl-4-oxopentan-2-yl)-sulfamethoxazole  中文名：  分子式：C16H21N3O4S 

小鼠β酚(β-naphthol)LISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Bisphenol P  中文名：双酚P  分子式：C24H26O2
病毒PCR检测试剂盒说明书HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) D-丙氨酸甲酯盐酸盐质量规格：0.98D-Alanine Methyl Ester Hydrochloride

人脐动脉平滑肌细胞cDNAHUASMC cDNAD-丙氨酸叔丁酯盐酸盐质量规格：0.99D-Alanine tert-Butyl Ester Hydrochloride

V79细胞，中国仓鼠肺细胞 人亚历山大细胞系,PLC/PRF/5细胞 膀胱上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)D-精氨酸质量规格：0.98D-Arginine

猞猁皮肤成纤维样细胞;ELS1D-核糖-5-1酸二钠盐质量规格：>85%,D-Ribose 5-phosphate di salt hydrate

VCAM1 Others Human 人 CD106 / VCAM1 人细胞裂解液 (阳性对照) 苏木色精，苏木素质量规格：进分Hematoxylin
恒河猴肾细胞;LLC-MK2亚甲基二水杨酸(异构体的混合物)(>90.0%(T))质量规格：>90.0%(T)Methylenedisalicylic Acid (mixture of isomers)

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化);PC-12(低分化) 细胞，BEL-7402细胞 D3细胞，129小鼠ES细胞2-氨基-2',5-二氯二苯甲酮(>98.0%(N))质量规格：>98.0%(N)2-Amino-2',5-dichlorobenzophenone

MiaPaCa-2, 人细胞 Human4-1丙氧基-2-羟基二苯甲酮(>97.0%(HPLC)(T))质量规格：>97.0%(HPLC)(T)4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone

CST4 Others Human 人 CST4 / Cystatin-4 / Cystatin-S 人细胞裂解液 (阳性对照) 3,3',4,4'-二苯酮四羧酸二酐(>96.0%(T))质量规格：>96.0%(T)3,3',4,4'-Benzophenonetetracarboxylic Dianhydride

人无色素睫状上皮细胞 cDNAHNPCEpiC cDNA10-去乙酰巴卡丁III质量规格：10-Deacetylbaccatin-III
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。