PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：中华鳖球状病毒PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Benzoyleneurea  中文名：亚苯甲酰基脲  分子式：C8H6N2O2  度：98.0%  小鼠激酶(PK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

N-Benzylmaleimide  中文名：N-苄基马来  分子式：C11H9NO2  度：98.0%  小鼠的牛血清白蛋白残留检测ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Benzyl nicotinate  中文名：烟酸苄酯  分子式：C13H11NO2  度：98.0%  小鼠标志物(CA724)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

(R)-(+)-1,1'-Bi-2-naphthol  中文名：(R)-(+)-1,1'-联-2-萘酚  分子式：C20H14O2  度：98.0%  小鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

5-Benzyl L-glutamate  中文名：L-谷氨酸5-苄酯  分子式：C12H15NO4  度：98.0%  小鼠基转移酶(ALT)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
维生素B2/核黄素   英文名称：   Human Vitamin B2   规格：   48T/96T   英文缩写：   VB2  Androstadienedione  897-06-3  中文名：1,4-雄烯二酮  分子式：C19H24O2  度：98.0%  关键词： 

维生素B2（VB2）检测   Detection of malic dehydrogenase  Androstadienedione  中文名：1,4-雄烯二酮  分子式：C19H24O2  度：98.0%

维生素B1（VB1）检测   The total amino acid (TAA) detection  Androstanolone 17-benzoate  1057-07-4  中文名：雄诺龙苯甲酸酯  分子式：C26H34O3 

微量游离血红蛋白测试盒   ace free hemoglobin test case                 Retigabine  150812-12-7  中文名：瑞替加滨  分子式：C16H18FN3O2 

微量游离血红蛋白（FHb）测定试剂盒（比色法）  Precursor of cefcapene diisopropylanmine salt  中文名：  分子式：C28H42N6O8S2
中华鳖球状病毒PCR检测试剂盒说明书HUVEC pre-screened Pellet 人脐内皮细胞(预选型) > 1 mio.cells 角质细胞培养基KM-acf没食子酸一水物质量规格：>98%,ARGallic acid monohydrate

CL-0389NCI-H1688(人典型小细胞细胞)5×106cells/瓶×21-酮戊二酸二钠盐(>98%,BR)质量规格：>98%,BRa-Ketoglutaric acid, di salt, dihydrate

S100A4 Others Mouse 小鼠 S100A4 人细胞裂解液 (阳性对照) 氢氧化钙(>95%,BR)质量规格：>95%,BRCalcium hydroxide

人无色素睫状上皮细胞总RNAHNPCEpiC NAN-甲基糠酰羟1酸(>99.0%(HPLC))质量规格：>99.0%(HPLC)N-Methylfurohydroxamic Acid

大耳山羊肺细胞;LDG-1 大鼠主动脉平滑肌细胞，A10细胞 BNL1ME A.7R.1细胞，BALB/C小鼠肝上皮细胞2,2'-二辛可宁酸二钾盐水合物(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)2,2'-Bicinchoninic Acid Dipotassium Salt Hydrate
人成纤维细胞-心房HCF-aa氟氯西林钠(标准品)质量规格：含量测定，标准品Flucloxacillin

EPHA3 Others Rat 大鼠 EphA3 人细胞裂解液 (阳性对照) 巴利森苷A；派立辛质量规格：HPLC≥98%，标准品Parishin A

非洲绿猴肾细胞;CV-1山楂酸,马斯里酸质量规格：HPLC≥98%，标准品Maslinic acid

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化);PC-12(高分化) 肺扁平上皮癌细胞，QG-56细胞 E14细胞，129小鼠ES细胞2-并咪唑-5-磺酸,紫外线吸收剂 UV-T质量规格：>98%2-Phenylbenzimidazole-5-sulfonic acid

KM3, 人细胞 Human3,4-二甲氧基肉桂酸(标准品)质量规格：>98%,标准品3,4-Dimethoxycinnamic acid
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。