【产品名称】: 黄热病病毒PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Yellow Fever Virus(YFV)RTPCR
【货号】: BKP4550

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

黄热病病毒PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

Cholesterol  57-88-5  中文名：胆固醇  分子式：C27H46O  度：98.0%  关键词：    小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Chlorpheniramine maleate  113-92-8  中文名：马来酸氯苯那敏  分子式：C20H23ClN2O4  度：98.0%      小鼠β基己糖苷酶A(β-HexA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Chlorotetracycline  57-62-5  中文名：金霉素  分子式：C22H23ClN2O8  度：98.0%      小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Chlorogenic acid  327-97-9  中文名：绿原酸  分子式：C16H18O9  度：98.0%  关键词：  *; 抗氧化; 莽草酸; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Chlorhexidine acetate  56-95-1  中文名：醋酸氯己定  分子式：C26H38Cl2N10O4  度：98.0%  关键词：    小鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Bi-linderone  1227375-09-8  中文名：  分子式：C34H32O10 

小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Methyl (3R)-3-(tert-butyldimethylsilyloxy)-5-oxo-6-triphenylphosphoranylidenehexanoate  147118-35-2  中文名：  分子式：C31H39O4PSi  度：98.0%  关键词： 

小鼠α1酸性糖蛋白elisa试剂盒   小鼠α1酸性糖蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠α1酸性糖蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠α1酸性糖蛋白试剂盒、小鼠α1酸性糖蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Bindone  1707-95-5  中文名：双茚二酮  分子式：C18H10O3 

小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Bezafibrate  中文名：苯扎贝特  分子式：C19H20ClNO4  度：98.0%

小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Estradiol heptanoate  4956-37-0  中文名：庚酸雌二醇  分子式：C25H36O3
HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) N-三苯甲基羧酸洛沙坦质量规格：美国进口N-Trityl Losartan Carboxylic Acid

CL-0270CRT(人神经细胞)5×106cells/瓶×2O-乙酰洛沙坦质量规格：美国进口O-Acetyl Losartan

KB-C1.5细胞，细胞 人T瘤转基因细胞,Jurkat D,E细胞 人上皮细胞;Hep-2洛沙坦N2-葡萄糖苷酸质量规格：美国进口Losartan N2-Glucuronide

769-P(人肾细胞腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2洛沙坦质量规格：美国进口Losartan

ACVRL1 Others Rat 大鼠 ALK-1 / ACVRL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 洛匹那韦代谢产物M-3/M-4质量规格：美国进口Lopinavir Metabolite M-3/M-4
黄热病病毒PCR检测试剂盒说明书MIApaca-2细胞，人细胞 人成纤维细胞,HT1080细胞 615小鼠瘤株;HP615DCCIN，N-二环己基碳1克AR，99%

HuH-6(人肝母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2流醋铈;流醋铈铵 CqRIUM(IV) SULFcTq TqTRcHYDRcTq 1094-4-2

Promocell C-22010 Endothelial Cell Growth Medium, 内皮细胞生长培养基(即用型) 500ml2,5-二本恶唑shēng huà shì jì容量：500毫升

人骨骼肌细胞裂解物HSkMCLAMMONIUMOXALATEMONOHYDRATE草酸*500G6009-70-7RT

PRKCD Others Mouse 小鼠 PKC delta / PRKCD 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (8-羟基)
PCR检测试剂盒

黄热病病毒PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。