PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：坎氏弧菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Bupivacaine   18010-40-7  中文名：盐酸布比卡因  分子式：C18H29ClN2O  度：98.0%  关键词：    小鼠内皮脂肪酶(EL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Buergerinin G  263764-83-6  中文名：  分子式：C9H12O4  度：%  关键词：  北玄参; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠酶(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Bromhexine   611-75-6  中文名：盐酸溴己新  分子式：C14H21Br2ClN2  度：98.0%      小鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Brinzolamide  138890-62-7  中文名：布林佐胺  分子式：C12H21N3O5S3  度：98.0%  关键词：    小鼠胃动素(MTL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Bortezomib  179324-69-7  中文名：硼替佐米  分子式：C19H25BN4O4  度：98.0%      小鼠内皮型合成酶(eNOS)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
小鼠Ⅰ型胶原N末端肽(X)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Clevidipine butyrate  中文名：丁酸氯维地平  分子式：C21H23Cl2NO6  度：98.0%

小鼠Ⅰ型胶原C端肽elisa试剂盒   小鼠Ⅰ型胶原C端肽试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠Ⅰ型胶原C端肽试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠Ⅰ型胶原C端肽试剂盒、小鼠Ⅰ型胶原C端肽eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Benzanthrone  1982/5/3  中文名：苯并蒽酮  分子式：C17H10O  度：98.0%  关键词： 

小鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Deoxyneocryptotanshinone  中文名：  分子式：C19H22O3 

小鼠Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Loxoprofen  中文名：洛索洛芬  分子式：C15H18O3 

小鼠8异素elisa试剂盒   小鼠8异素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠8异素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠8异素试剂盒、小鼠8异素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Benzanthrone  1982/5/3  中文名：苯并蒽酮  分子式：C17H10O
坎氏弧菌PCR检测试剂盒说明书HFF-1(人成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2(S,S)-(+)-2,3-丁二醇(>97.0%(GC))质量规格：>97.0%(GC)(S,S)-(+)-2,3-Butanediol

hMoCD14+-PB single donorPellet 人类外周血CD14+单核细胞团块单一来源，超 > 1 mio.cells 人脑微内皮细胞RNAHBMEC miRNA5 μg(-)-樟脑烷酸(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)(-)-Camphanic Acid

CM-M026小鼠骨髓基质细胞完全培养基100mL苦玄参苷IV(标准品)质量规格：HPLC≥98%,标准品Picfeltarraenin IV

ENPP3 Others Cynomolgus 食蟹猴 ENPP3 / CD203c 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 瓜子金皂苷XXXI(对照品)质量规格：HPLC≥98%,标准品Polygalasaponin XXXI

神经细胞培养基NM俾斯麦棕R质量规格：BSBismarck Brown R
CADM3 Others Mouse 小鼠 CADM3 / IGSF4B / NECL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 腺苷 3’-单1酸钠盐质量规格：美国进口Adenosine 3'-monophosphate  salt

肾皮层上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)腺苷 3',5'-二1酸钠盐质量规格：美国进口Adenosine 3',5'-diphosphate  salt

NRG1 Others Human 人 NRG1-beta 1 (ECD) 人细胞裂解液 (阳性对照) 腺苷 2',5'-二1酸钠盐质量规格：美国进口Adenosine 2',5'-diphosphate  salt

大鼠肾上皮细胞完全培养基 100mL腺苷5'-O-硫一1酸二锂盐质量规格：美国进口Adenosine 5'-O-thiomonophosphate dilithium salt

MR1 [derivative of HB-11048]中国仓鼠X小鼠B细胞杂交瘤 MR1 [derivative of HB-11048] Chinese hamster X mouse B lymphocyte hybridoma RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSα-酮戊二酸(标准品)质量规格：>98%,标准品2-Ketoglutaric acid
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。