PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：溶藻弧菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Buergerinin G  263764-83-6  中文名：  分子式：C9H12O4    兔子神经营养因子3(-3)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

(R,E)-Deca-2-ene-4,6-diyne-1,8-diol  931116-24-4  中文名：  分子式：C10H12O2    Rat serum total compleme (CH50) ELISA Kit 大鼠血清总补体(CH50)ELISA试剂盒

9,17-Octadecadiene-12,14-diyne-1,11,16-triol  211238-60-7  中文名：  分子式：C18H26O3    HumaerminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit 人末端补体复合物C5b-9(TCCC5b-9)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

1-Acetoxy-9,17-octadecadiene-12,14-diyne-11,16-diol  213905-35-2  中文名：  分子式：C20H28O4    Humandeubiquitinatingenzyme,DUBELISA试剂盒人泛素分解酶(DUB)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1,6-Dioxaspiro[4.5]decan-2-methanol  83015-88-7  中文名：  分子式：C9H16O3    组织MET激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
小鼠8异素(mouse 8-iso-PG)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Benzyl carbamate  621-84-1  中文名：氨基甲酸苄酯  分子式：C8H9NO2 

小鼠8异素(8-iso-PG)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Benzidamine   中文名：盐酸苄达明  分子式：C19H24ClN3O  度：98.0%

小鼠8异素   英文名称：   8-isoprostane F2α   规格：   48T/96T   英文缩写：   8-iso-PG  N6-Benzoyl-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-deoxyadenosine  64325-78-6  中文名：N6-苯甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脱氧腺苷  分子式：C38H35N5O6 

小鼠8羟基脱氧鸟苷elisa试剂盒   小鼠8羟基脱氧鸟苷试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠8羟基脱氧鸟苷试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠8羟基脱氧鸟苷试剂盒、小鼠8羟基脱氧鸟苷eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Benzalazine  中文名：二苄肼  分子式：C14H12N2  度：98.0%

小鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Benzidamine   中文名：盐酸苄达明  分子式：C19H24ClN3O
溶藻弧菌PCR检测试剂盒直销HFF细胞，小儿细胞 小鼠B细胞杂交瘤细胞,SH2细胞 星形胶质细胞培养基AM丁草胺标准溶液(10μg/ml,u=7%)质量规格：10μg/ml,u=7%Butachlor solution

MCF 7B(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2炔草隆(标准品)质量规格：分析标准品Buturon

Ana-1(小鼠巨噬细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R059大鼠膀胱平滑肌细胞完全培养基100mL 表达SV40T和EBNA1的人胚肾细胞;293ET丁苯威(标准品)质量规格：分析标准品,99%Fenobucarb

CM-H079人微内皮细胞完全培养基100mL唑螨酯(标准品)质量规格：分析标准品,99.5%Fenpyroximate

Spike Others MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 Protein (aa 1-725) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 精乙基噁唑禾草灵(标准品)质量规格：分析标准品,97%Fenoxaprop-p-ethyl
T84(人腺癌肺转移细胞) 5×106cells/瓶×2特立氟胺质量规格：>99%,二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)抑制剂A771726 (Teriflunomide)

HBMEC-c 人类脑部微内皮细胞(HBMEC) 500,000cells 脑微内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)当归酰基戈米辛H(标准品)质量规格：HPLC≥96%,标准品Angeloylgomisin H

软骨细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)美曲勃龙(R-1881)质量规格：>98%,BRMethyltrienolone

IL6ST Others Rat 大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 人细胞裂解液 (阳性对照) 克罗米通质量规格：>97%,BRCrotamiton

PA317 小鼠胚胎成纤维细胞L-延胡索乙素质量规格：美国进口L-Tetrahydropalmatine
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。