PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：解脲脲原体PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Bis[4-(dimethylamino)phenyl]methane  中文名：双[4-(二甲氨基)苯基]甲烷  分子式：C17H22N2  度：98.0%  小鼠雌激素(E)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

2,2-Bis(hydroxymethyl)butyric acid  中文名：2,2-二羟甲基丁酸  分子式：C6H12O4  度：98.0%  小鼠白介素-6(mouse IL-6)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

1,3-Bis(4,5-dihydro-2-oxazolyl)benzene  中文名：1,3-双(4,5-二氢-2-恶唑)苯  分子式：C12H12N2O2  度：98.0%  小鼠白介素-7(mouse IL-7)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

4,4'-Cyclohexylidenebisphenol  中文名：4,4'-环亚己基双苯酚  分子式：C18H20O2  度：98.0%  小鼠白介素-8(mouse IL-8)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

2,2'-Dithiobisbenzanilide  中文名：2,2'-二苯甲酰氨基二苯二硫  分子式：C26H20N2O2S2  度：98.0%  小鼠白介素-9(mouse IL-9)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装
小鼠(NO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N-(2-methyl-4-oxopentan-2-yl)-sulfamethoxazole  中文名：  分子式：C16H21N3O4S  度：98.0%

小鼠(mouse NO)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Imidazo[1,2-b]pyridazine  中文名：  分子式：C6H5N3 

小鼠 IgG(mouse IgG)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 ADI  Azilsartan  147403-03-0  中文名：阿齐沙坦  分子式：C25H20N4O5  度：98.0%  关键词： 

小鼠 IGF-II (Mouse IGF-II) ELISA Kit   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D  Azathioprine  中文名：硫唑嘌呤  分子式：C9H7N7O2S  度：98.0%

小鼠 ACTH(mouse ACTH)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Phoenix  Otophylloside F  250217-73-3  中文名：青阳参苷F  分子式：C48H76O16  度：95.0%  关键词：  抗; 孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
解脲脲原体PCR检测试剂盒直销HO-8910PM(人高转移细胞) 5×106cells/瓶×2比阿培南（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Biapenem

hMSC-AT-c 人类脂肪组织间质干细胞(hMSC-AT) 500,000cells 小鼠背脊髓神经元MN-dsc胆红素(标准品)质量规格：UV≥98%，标准品Bilibubin

CL-0462UMR-106(大鼠细胞)5×106cells/瓶×2保泰（标准品）质量规格：HPLC>99%,标准品phenylbutazone

HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 保泰钙质量规格：>98%phenylbutazone Calcium

人髓核细胞RNAHNPC miRNA5 μg保泰钠质量规格：>98%phenylbutazone
SOST Others Rat 大鼠 SOST / Sclerostin 人细胞裂解液 (阳性对照) 依鲁替尼(PCI32765)质量规格：>98%,BTK抑制剂Ibrutinib,PCI-32765

人张氏肝细胞;Chang liver右旋兰索拉唑(标准品)质量规格：含量测定，标准品(R)-Lansoprazole

IL17RC Others Human 人 IL17RC (aa 1-454) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 右旋兰索拉唑质量规格：>99%,BR(R)-Lansoprazole

恒河猴肾细胞;RM-3乐伐替尼质量规格：>98%,VEGFR抑制剂Lenvatinib(E7080)

HuT78细胞，T细胞细胞 恶性色素瘤,A375细胞 EB病毒转化的人B细胞;HH-015-硝基吲哚(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)5-Nitroindole
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。