PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：锥虫通用PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Betaxolol   中文名：盐酸倍他洛尔  分子式：C18H30ClNO3  度：98.0%  豚鼠端粒酶(TE)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Ciprofloxacin   中文名：盐酸环丙沙星  分子式：C17H19ClFN3O3  度：98.0%  豚鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装        

Lincomycin   中文名：盐酸林可霉素  分子式：C18H35ClN2O6S  度：98.0%  豚鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Diphenhydramine   中文名：盐酸苯海拉明  分子式：C17H22ClNO  度：98.0%  豚鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

   中文名：盐酸利多卡因  分子式：C14H23ClN2O  度：98.0%  豚鼠端粒酶(TE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
纤维素酶（CL）测试盒   可见分光光度法   50管/24样              3-Aminoadamantan-1-ol  中文名：  分子式：C10H17NO 

纤维蛋白原（FIB）测试盒（半自动凝血仪）  Rifampicin  中文名：利福平  分子式：C43H58N4O12 

纤维蛋白原 (Fibrinogen)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Atorvastatin calcium  134523-03-8  中文名：阿托伐他汀钙  分子式：C33H35FN2O5  度：98.0%  关键词： 

纤溶酶原激活剂抑制因子2   英文名称：   Human Plasminogen Activator Inhibitor 2   规格：   48T/96T   英文缩写：   PAI2  Aspirin  50-78-2  中文名：阿司匹林  分子式：C9H8O4 

纤溶酶原激活剂抑制因子1   英文名称：   Human Plasminogen Activator Inhibitor 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   PAI-1  Aspirin  50-78-2  中文名：阿司匹林  分子式：C9H8O4  度：99.0%
锥虫通用PCR检测试剂盒说明书HPrSMC Pellet 人类平滑肌细胞团块 > 1 mio.cells 人星形胶质细胞cDNAHA cDNA芝麻素质量规格：HPLC≥98%，BRSesamin

CL-0106HFL1(人)5×106cells/瓶×2芝麻素(标准品)质量规格：HPLC≥98%,标准品Sesamin

KIR2DL4 Others Human 人 KIR2DL4 / CD158D CHO细胞裂解液 (阳性对照) 槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷(标准品)质量规格：HPLC≥98%,标准品Quercetin 3-O-glucoside-7-O-rhamnoside

人表皮色素细胞-浅色素裂解物HELM-l L知母皂苷A3(标准品)质量规格：HPLC(ELSD)>97%，标准品Timosaponin A3

新生牛眼晶体上皮细胞;NBLE 人细胞，SW579细胞 RIN-m5F细胞，小鼠β瘤细胞正十五烷（标准品）质量规格：内标N-PENTADECANE
人前脂肪细胞-皮下HPA-swo7iumMETABISULFITE焦亚钠(重亚钠)ACS级白色粉末RTsigma

ERN1 Others Human 人 ERN1 / IRE1 (aa 465-977) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 二苯基 Diphenylcarbinol,99% 91-01-0 25G 通用试剂

长尾绿猴胚胎细胞;4179碳醋胍;碳醋亚安脲;胍碳醋盐 Gucnidinq ccronctq 293-82-1

HL-7702细胞，肝细胞 人腺癌细胞,LS180细胞 CM-R037大鼠小肠隐窝上皮细胞完全培养基100mLPROTEINMWMARKER,HIGHRANGE蛋白Marker生物技术级液体FROZENsigma

大鼠肺泡巨噬细胞;NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]577-11-7多库酯钠Docusate wo7ium
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。