PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：透明毛圆线虫PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Benzophenone  中文名：二苯甲酮  分子式：C13H10O  度：98.0%  小鼠白介素3(IL-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Coumarin 7  中文名：香豆素 7  分子式：C20H19N3O2  度：98.0%  小鼠白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Aspartame  中文名：阿司帕坦  分子式：C14H18N2O5  度：98.0%  小鼠白介素-5(IL-5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T            

Aripiprazole  中文名：阿立哌唑  分子式：C23H27Cl2N3O2  度：98.0%  小鼠白介素15(IL-15)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

1,6-Anhydro-β-D-glucose  中文名：1,6-脱水-β-D-葡萄糖  分子式：C6H10O5  度：98.0%  小鼠白介素13(IL-13)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
豚鼠组胺(HIS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Altrenogest  850-52-2  中文名：烯丙孕素  分子式：C21H26O2 

豚鼠转化生长因子β1elisa试剂盒   豚鼠转化生长因子β1试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠转化生长因子β1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：豚鼠转化生长因子β1试剂盒、豚鼠转化生长因子β1eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Amorolfine   78613-38-4  中文名：盐酸阿莫洛芬  分子式：C21H36ClNO 

豚鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Amorolfine  67467-83-8  中文名：阿莫罗芬  分子式：C21H36ClNO 

豚鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  alpha-Terthienylmethanol  中文名：  分子式：C13H10OS3  度：%

豚鼠主要组织相容性复合体elisa试剂盒   豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒、豚鼠主要组织相容性复合体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     Lenalidomide  191732-72-6  中文名：来那度胺  分子式：C13H13N3O3
透明毛圆线虫PCR检测试剂盒直销ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人细胞裂解液 (阳性对照) 苉(升华提)质量规格：>99.5%(GC)Picene (purified by sublimation)

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA5,6,11,12-四苯基并四苯(升华提)质量规格：>99.0%(GC)5,6,11,12-Tetraphenylnaphthacene (purified by sublimation)

13. 肝脏细胞系统1,2,3,4,8,9,10,11,15,16,17,18,22,23,24,25-十六氟酞菁铜(II)(以升华法化)质量规格：>98.0%(N)(T)1,2,3,4,8,9,10,11,15,16,17,18,22,23,24,25-Hexadecafluorophthalocyanine Copper(II) (purified by sublimation)

CL-0075DU 145(人细胞)5×106cells/瓶×23,4,9,10-苝四羧酸二酐(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)3,4,9,10-Perylenetetracarboxylic Dianhydride

小鼠胚胎成骨细胞前体细胞;MC3T3-E1 大鼠脉络膜细胞完全培养基 100mL苔酚葡萄糖苷；地衣二醇葡萄糖苷（标准品）质量规格：HPLC≥97%，标准品Orcinol glucosid
CCL21 Others Human 人 CCL21 / 6Ckine 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 脒shēng huà shì jì容量：1米

人细胞;Hela S3 [HeLaS3]2-溴-2-基炳酰溴 2-Bromo-2-mqthylpropionyl bromidq 0769-82-1

A-431细胞，表皮癌细胞 人耐VCR胃腺癌细胞,SGC-7901/VCR细胞 猪小肠上皮细胞;ZYM-DIEC02戊酸，英文名或英文缩写：Valeric acid，级别：CP，98%，规格：100克

tTA基因修饰的小鼠细胞(B类);Pan02-CAG-tTA-3E6顺丁希二酸钠250毫克2～8℃

SERPINF1 Others Mouse 小鼠 SerpinF1 人细胞裂解液 (阳性对照) 135145-90-32,5-二录本硼酸2,5-Dichloropxenylboronic acid
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。