PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：马泰勒梨形虫PCR检测试剂盒原说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Androstanolone 17-benzoate  1057-07-4  中文名：雄诺龙苯甲酸酯  分子式：C26H34O3    人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)酶联吸附测定试剂盒   Human tPA (Plasminogen Activator, Tissue) ELISA Kit

Rosuvastain Calcium  147098-20-2  中文名：瑞舒伐他汀钙  分子式：C22H28FN3O6S    人纤溶抑制因子(TAFI)酶联吸附测定试剂盒   Human TAFI (Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor) ELISA Kit

Ambrisentan  177036-94-1  中文名：安倍生坦  分子式：C22H22N2O4    人纤维蛋白(FBL)酶联吸附测定试剂盒   Human FBL (Fibrillarin) ELISA Kit

Propacetamol   66532-86-3  中文名：盐酸丙帕他莫  分子式：C14H21ClN2O3    人生长激素受体(GHR)酶联吸附测定试剂盒   Human GHR (Growth Hormone Receptor) ELISA Kit               

Pirfenidone  53179-13-8  中文名：哌非尼酮  分子式：C12H11NO    人组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
兔子脱氢表雄酮酯(DHEA-S)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  1-Allyl-3,5-Dimethylpyrazole  中文名：1-烯丙基-3,5-二甲基吡唑  分子式：C8H12N2  度：98.0%

兔子透明质酸elisa试剂盒   兔子透明质酸试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子透明质酸试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子透明质酸试剂盒、兔子透明质酸eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  9-Hydroxy-α-lapachone  中文名：  分子式：C15H14O4  度：96.0%

兔子透明质酸(HA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              9,9-Bis(4-hydroxyphenyl)fluorene  中文名：9,9-双(4-羟苯基)芴  分子式：C25H18O2 

兔子髓0脂碱性蛋白elisa试剂盒   兔子髓0脂碱性蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子髓0脂碱性蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子髓0脂碱性蛋白试剂盒、兔子髓0脂碱性蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  9-Methoxy-α-lapachone  35241-80-6  中文名：  分子式：C16H16O4  度：%  关键词：  梓; 萘醌; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

兔子髓0脂碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  9-Oxooctadeca-10,12-dienoic acid  54232-58-5  中文名：  分子式：C18H30O3
马泰勒梨形虫PCR检测试剂盒原说明书IL33 Protein Human 重组人 IL33 / Ierleukin-33 / NF-HEV 蛋白盐酸诺拉曲噻质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养 Nolatrexed dihydrochloride

PC-3M-2B4(人低转移细胞株) 5×106cells/瓶×2 CHO/dhFr-(中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞)PD 173074质量规格：>98%,BR,可用于细胞培养PD 173074

CL-0253A-427(人细胞)5×106cells/瓶×2PH-797804质量规格：>98%,BR,可用于细胞培养PH-797804

PGF Others Mouse 小鼠 PIGF / PLGF 人细胞裂解液 (阳性对照) Celite硅藻土，酸洗(用于总膳食纤维含量分析,TDF-100A)质量规格：用于总膳食纤维含量分析,TDF-100ACelite, acid-washed

人膀胱平滑肌细胞cDNAHBdSMC cDNACelite® 硅藻土545(助滤剂,通量煅烧（filter aid,flux calcined）)质量规格：助滤剂,通量煅烧（filter aid,flux calcined）Celite® 545
EFNA5 Others Human 人 EphrinA5 人细胞裂解液 (阳性对照) (R)-(+)-氨鲁米特质量规格：美国进口(R)-(+)-Aminoglutethimide

人食道上皮细胞总RNAHEEpiC NAS-(-)-氨鲁米特L-1酸盐质量规格：美国进口S-(-)-Aminoglutethimide L-Tartrate Salt

TNFRSF13C Others Rat 大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人细胞裂解液 (阳性对照) R-(+)-氨鲁米特L-1酸盐质量规格：美国进口R-(+)-Aminoglutethimide L-Tartrate Salt

叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-212-羟基-氟他胺质量规格：美国进口2-Hydroxy-flutamide

PC-2细胞，人细胞 人细胞系,HS-4细胞 小鼠色素瘤瘤株;B16(S)-(-)-O-去甲卡维地洛质量规格：美国进口(S)-(-)-O-Desmethyl Carvedilol
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。