PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：绵羊痘病毒PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

6-Amino-1-methyluracil  2434-53-9  中文名：  分子式：C5H7N3O2    兔子转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Gimeracil  103766-25-2  中文名：吉莫斯特  分子式：C5H4ClNO2    Rat vascular endothelial cell growth factor receptor 1 (VEGFR-1) ELISA Kit 大鼠内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1)ELISA试剂盒

Amlexanox ethyl ester  68301-99-5  中文名：  分子式：C18H18N2O4    HumanAi-keratinaibody,AKAELISAKit 人抗角蛋白抗体(AKA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

1,2-Cyclohexanedicarboximide  7506-66-3  中文名：  分子式：O2    Humancytokeratin13,CK-13ELISA试剂盒人细胞角蛋白13(CK-13)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Perospirone   129273-38-7  中文名：盐酸哌罗匹隆  分子式：C23H31ClN4O2S    组织HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次
兔碱性成纤维细胞生长因子   英文名称：   Rabbit Basic Fibroldast Growth Factor   规格：   48T/96T   英文缩写：   BFGF  4β-Hydroxywithanolide E  54334-04-2  中文名：4β-羟基醉茄内酯E  分子式：C28H38O8  度：98.0%  关键词：  蜕皮甾体拮抗剂; ; 酸浆属; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

兔碱性成纤维生长因子(rabbit b-FGF/FGF-2)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C18H27N3O4 

兔碱性0酸酶(ALP)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  5-(4-((3-chloro-4-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-6-yl)furan-2-carbaldehyde  中文名：  分子式：C26H17ClFN3O3  度：98.0%

兔基质细胞衍化生长因子1a   英文名称：   Rabbit Somal cell Derived Factor 1a   规格：   48T/96T   英文缩写：   SDF1a  4-Benzoyl 4'-methyldiphenyl sulfide  中文名：4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚  分子式：C20H16OS  度：98.0%

兔基质金属蛋白酶-9(rabbit MMP-9)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  中文名：  分子式：C18H24N4O18
绵羊痘病毒PCR检测试剂盒说明书NCI-H716(人结直肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 3T3-L1(小鼠脂肪细胞)N'-Fmoc-L-赖氨酸质量规格：>98%Fmoc-Lys-OH

CL-0318B16-F1(小鼠色素瘤细胞)5×106cells/瓶×2Fmoc-天门冬氨酸-β-苄酯质量规格：>98%Fmoc-L-aspartic acid β-benzyl ester

REG1B Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1B / PSPS2 人细胞裂解液 (阳性对照) 芴甲氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯质量规格：>98.5%,BRFmoc-Asp(OH)-OtBu

人真皮微内皮细胞总RNAHDMEC NAFmoc-L-赖氨酸盐酸盐质量规格：0.98Fmoc-Lys-OH·HCl

MDA-MB-435S细胞，人癌细胞 鼠成纤维细胞系,GR细胞 原代神经元细胞特制基础无血清培养基Many types of cells包装：500/100ml氧化白藜芦醇(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Oxyresveratrol
人纤维环细胞HAFC1-溴-4-壬基苯(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)1-Bromo-4-nonylbenzene

FSTL1 Others Mouse 小鼠 FSTL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 1-溴-4-戊苯(>90.0%(GC))质量规格：>90.0%(GC)1-Bromo-4-pentylbenzene

大额牛与婆罗门牛杂交F1代皮肤成纤维样细胞;BOS-61-溴-4-己苯(>90.0%(GC))质量规格：>90.0%(GC)1-Bromo-4-hexylbenzene

大鼠细胞;UMR-106 ，LTEP-a-2细胞 MSCS细胞，猴的骨髓间充质干细胞1-溴-4-庚苯(含稳定剂铜屑)(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)1-Bromo-4-heptylbenzene (stabilized with Copper chip)

PANC-1, 人细胞 Human1-溴-4-正辛基苯(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)1-Bromo-4-n-octylbenzene
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。