PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：神经肉孢子虫PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

5-Androsten-3β-ol-17-one ethyleneketal  7745-40-6  中文名：  分子式：C21H32O3  度：98.0%      小鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

5-Aminouracil  932-52-5  中文名：5-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2  度：98.0%      小鼠抗凝血酶受体(A)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

5-Aminosalicylic acid  89-57-6  中文名：5-氨基水杨酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%  关键词：    小鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装        

5-Aminoindole  5192-03-0  中文名：5-氨基吲哚  分子式：C8H8N2  度：98.0%      小鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Aminoindazole  19335-11-6  中文名：5-氨基吲唑  分子式：C7H7N3  度：98.0%      小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
土壤中性0酸酶（S-NP）试剂盒   可见分光光度法   50管/48样  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  中文名：4-氨基-3-羟基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%

土壤中性0酸酶(S-NP)测试盒   可见分光光度法   50管/48样  4-Aminobenzophenone  1137-41-3  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO  度：99.0%  关键词： 

土壤蔗糖酶(S-SC)测试盒   可见分光光度法   50管/24样              4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  中文名：4-氨基-3-羟基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S 

土壤硝态氮测试盒   可见分光光度法   50管/48样  Triamcinolone acetonide  76-25-5  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6  度：98.0%  关键词： 

土壤纤维素酶（S-CL）试剂盒   可见分光光度法    50管/24样  4-Aminoantipyrine  1983/7/8  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%  关键词：
神经肉孢子虫PCR检测试剂盒说明书P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠细胞) 5×106cells/瓶×2 MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠原成骨细胞)薯蓣皂甙质量规格：BR，含量≥95.0%Dioscin

CL-0288MA-891(小鼠癌高转移细胞)5×106cells/瓶×2薯蓣皂素(标准品)质量规格：HPLC>98.0%,标准品Diosgenin

CLEC4F Others Rat 大鼠 CLEC4F / CLECSF13 人细胞裂解液 (阳性对照) 薯蓣皂素质量规格：>95%,BRDiosgenin

人前脂肪细胞-内脏cDNAHPA-v cDNAD-半胱氨酸盐酸盐一水质量规格：度大于98%,BR，一水物D-Cysteine hydrochloride monohydrate

BCaP-37细胞，人癌细胞 猴肾细胞系,MA-104细胞 肠内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)钙蛋白酶抑制剂II(进口)质量规格：≥95%,美国进口Calpain Inhibitor II(ALLM)
人微内皮细胞HMMEC1,10-双[(4-乙氧羰基)苯氧基]癸烷质量规格：1,10-Bis[4-(ethoxycarbonyl)phenoxy]decane

CD1D & B2M Others Human 人 CD1D & B2M Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,4-苯二硫醇(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)1,4-Benzenedithiol

非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS3;Vero-HCV-NS31,3-双[2-(4-羟苯基)-2-丙基]苯(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)1,3-Bis[2-(4-hydroxyphenyl)-2-propyl]benzene

大鼠癌细胞;SHZ-88 细胞，BEL-7405细胞 MEF细胞，早代小鼠胚胎成纤维细胞双(氨甲基)降莰烷(含有)(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)Bis(aminomethyl)norbornane (mixture of isomers)

MG-63, 人细胞 Human1,4-双(3-羟基苯氧基)苯(>96.0%(GC))质量规格：>96.0%(GC)1,4-Bis(3-hydroxyphenoxy)benzene
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。