PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：普罗威登斯菌通用PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

3-Aminoadamantan-1-ol  中文名：  分子式：C10H17NO    素 E1(PGE1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  

3-Amino-5-phenylpyrazole  中文名：3-氨基-5-苯基吡唑  分子式：C9H9N3    血小板生成素   英文名称：   Thromboietin   规格：   48T/96T   英文缩写：   TPO

3-Amino-5-mercapto-1,2,4-triazole  中文名：3-氨基-5-巯基-1,2,4-三唑  分子式：C2H4N4S    总蛋白S   英文名称：   total protein S   规格：   48T/96T   英文缩写：   TPS

3-Amino-4-methylbenzamide  中文名：3-氨基-4-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O    坏死因子相关凋亡诱导配体   英文名称：   tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand   规格：   48T/96T   英文缩写：   AIL/APO 2L

3-Amino-4-hydroxybenzoic acid  中文名：3-氨基-4-羟基苯甲酸  分子式：C7H7NO3    坏死因子相关凋亡诱导配体受体1   英文名称：   tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   AIL R1
人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Capecitabine  中文名：卡培他滨  分子式：C15H22FN3O6 

人可溶性P选择素(sP-selectin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tigecycline  中文名：  分子式：C29H39N5O8 

人抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tigogenin  77-60-1  中文名：剑麻皂素  分子式：C27H44O3  度：98.0%  关键词：  毛地黄属; 万年兰属; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

人抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Tigogenin  77-60-1  中文名：剑麻皂素  分子式：C27H44O3 

人抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tigogenin  中文名：剑麻皂素  分子式：C27H44O3
普罗威登斯菌通用PCR检测试剂盒说明书SK-OV-3[SKOV-3]细胞，人细胞 人上皮细胞,HBE细胞 脑膜细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)CLA (>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)CLA

兔角膜前基质层成纤维细胞;RCFBFMCLA (>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)MCLA

TEK Others Human 人 Tie2 / CD202b 人细胞裂解液 (阳性对照) FCLA 自由酸[化学发光试剂]质量规格：化学发光试剂FCLA Free Acid

CL-0143Lncap clone FGC(人细胞)5×106cells/瓶×2红-CLA(含氮量：9.00-10.30 %)质量规格：含氮量：9.00-10.30 %Red-CLA

CTSZ Others Human 人 CTSZ 人细胞裂解液 (阳性对照) 13X分子筛(60-80目,气相、液相色谱柱专用)质量规格：60-80目,气相、液相色谱柱专用Molecular sieves Type 13X
MSC, 小鼠雪旺细胞6-氮杂尿嘧啶shēng huà shì jì容量：RT，避光25克

人类成纤维细胞系;CNLMG-B5537SKIN 人肝动脉内皮细胞完全培养基 100mL茜素 Alizarin,97% 72-48-0 5G 通用试剂

人上皮细胞RNAHMEpiC miRNA5 μg二言醋组安 Histcminq dixy7nochloridq 1926/9/8

PCNA Others Human 人 PCNA 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) LOADINGDYEBASE,25X25X 蛋白电泳上样染料超级暗紫色微粘稠液体RTsigma

非洲绿猴肾细胞;VERO444-94-8儿价级儿流(剧毒)7m7w
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。