PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：猪病毒价格使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

3,4-O-Isopropylidene shikimic acid  183075-03-8  中文名：  分子式：C10H14O5    Humanphosphoinositide-specificphospholipaseC,PIPLCELISAKit人0酯酰肌醇特异性0酯酶C(PIPLC)ELISA试剂盒规格：96T/48T

3a-Hydroxy-3,3a,7,7a-tetrahydrobenzofuran-2,6-dione  55604-88-1  中文名：  分子式：C8H8O4    兔子葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

1,18-Octadecanediol  3155-43-9  中文名：  分子式：C18H38O2    Human adenovirus IgM (ADV-IgM) ELISA Kit 人腺病毒IgM(ADV-IgM)ELISA试剂盒

1,2-O-Isopropylidene-β-D-fructopyranose  66900-93-4  中文名：  分子式：C9H16O6    Humanai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgAELISAKit 人抗肌内膜抗体IgA(EMAIgA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

1-Chloro-6-(5-(prop-1-ynyl)thiophen-2-yl)hexa-3,5-diyn-2-ol  78876-52-5  中文名：  分子式：C13H9ClOS    HumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISA试剂盒人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
柠檬酸（CA）含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样              Rizatriptan benzoate  145202-66-0  中文名：苯甲酸利扎曲坦  分子式：C22H25N5O2 

镍快速测试盒   Nickel rapid test case  Ranitidine  66357-35-5  中文名：雷尼替丁  分子式：C13H22N4O3S  度：98.0%  关键词： 

镍测试盒   Nickel test case  4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester  中文名：  分子式：C16H16N4O3  度：98.0%

尿酸含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样              Tropisetron   105826-92-4  中文名：盐酸托烷司琼  分子式：C17H21ClN2O2 

尿激酶型纤溶酶原激活因子受体 (uPA-R)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     O-Benzyl-L-tyrosine  16652-64-5  中文名：O-苄基-L-酪氨酸  分子式：C16H17NO3
猪病毒价格SW-13(人肾上腺皮质癌细胞) 5×106cells/瓶×2 MCF-7(人癌细胞)曙红Y,醇溶剂红 43质量规格：AREosin Y ,alcohol solution

CM-M068小鼠肾小管平滑肌细胞完全培养基100mL曙红B质量规格：BSEosin B

CD27 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD27 / TNFRSF7 人细胞裂解液 (阳性对照) 芦丁/芸香叶苷质量规格：>97%,BRRutin

小气道上皮细胞培养基SAEpiCM-prf芦丁/芸香叶苷(标准品)质量规格：≥98%，标准品Rutin

Hela P10s-11F细胞，人细胞 小鼠神经母细胞瘤细胞与大鼠细胞之融合细胞,NG108-15细胞 平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)新橙皮苷二氢查尔酮质量规格：≥95%,BRNeosperidin dihydrochalcone
视网膜色素上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)茄尼醇（标准品）质量规格：HPLC≥97%，标准品Solanesol

GRK6 Others Human 人 GRK6 / GPRK6 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 大波斯菊苷,芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(标准品)质量规格：HPLC≥98%,标准品Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside

tTA基因修饰的小鼠细胞(B类);Pan02-CAG-tTA-4B3秦皮苷（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Fraxin

SH-SY5Y细胞，神经母细胞瘤细胞 人细胞,GBC-SD细胞 CL-0048Ca Ski(人上皮细胞)5×106cells/瓶×2秦皮甲素（标准品）质量规格：≥98%，标准品Esculin

人APP-PS1(C410Y)双基因转染细胞株;7WCY1.0氨基三乙酸（标准品）质量规格：供HPLC法杂质检查用Nitrilotriacetic acid
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。