PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：血吸虫通用PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

5-Hydroxymethyl-2-furoic acid  中文名：5-羟甲基-2-糠酸  分子式：C6H6O4    细胞间粘附分子1   英文名称：   Human Iercellular Adhesion Molecule 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   ICAM-1

5-Formyl-2-furylboronic acid  中文名：  分子式：C5H5BO4    干扰素α受体   英文名称：   Human Ierferon α Receptor   规格：   48T/96T   英文缩写：   IFNαR

5-Formamide-1-(2-formyloxyethl)pyrazole  中文名：  分子式：C7H9N3O3    样生长因子结合蛋白-1   英文名称：   insulin-like growth factors binding protein-1   规格：   48T/96T   英文缩写：   IGFBP-1

5-Fluorouracil  中文名：  分子式：C4H3FN2O2    样生长因子结合蛋白-2   英文名称：   insulin-like growth factors binding protein-2   规格：   48T/96T   英文缩写：   IGFBP-2

5'-Deoxy-5-fluorocytidine  中文名：  分子式：C9H12FN3O4    样生长因子结合蛋白-3   英文名称：   insulin-like growth factors binding protein-3   规格：   48T/96T   英文缩写：   IGFBP-3
兔促卵泡素(rabbit FSH)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C18H27N3O4  度：98.0%

兔雌二醇(rabbi E2)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  5-Amino-1-naphthol  中文名：5-氨基-1-萘酚  分子式：C10H9NO  度：98.0%

兔超氧化物歧化酶   英文名称：   Rabbit Superoxide Dismase   规格：   48T/96T   英文缩写：   SOD  4-Benzoyl 4'-methyldiphenyl sulfide  中文名：4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚  分子式：C20H16OS 

兔超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           4-Difluoromethoxy-3-hydroxybenzaldehyde  中文名：  分子式：C8H6F2O3 

兔超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              5-Acetyl-3-chloro-10,11-dihydro-5H-dibenz[b,f]azepine  中文名：  分子式：C16H14ClNO
血吸虫通用PCR检测试剂盒说明书NRG1 Others Canine 狗 NRG1-alpha Protein (ECD) 人细胞裂解液 (阳性对照) 拉呋替丁（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Lafutidine

人肺动脉成纤维细胞RNAHPAF miRNA5 μg托可索仑/维生素E聚乙二醇琥珀酸酯质量规格：VE含量≥260.00mg/g as dl-α-tocopherolTocofersolan,VE-TPGS

兔晶体上皮细胞永生系;N/N1003A(RLE) 细胞，HCT 116细胞 M-1细胞，小鼠肾集合管细胞(SV40转化)盐酸甲氧那明质量规格：>98.5%,CPMethoxyphenamine HCl

人胚肺细胞系;KuMA安倍生坦质量规格：>98%Ambrisentan

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 安倍生坦(标准品)质量规格：>98%,标准品Ambrisentan
HeLa 229 人细胞5-FAM, SE；5-羧基荧光素琥珀酯质量规格：0.95-Carboxyfluorescein N-succinimidyl ester

EA.hy926人脐细胞融合细胞 EA.hy926 human umbilical vein cell fusion cells DMEM培养基+10%FBS5,6-FAM；5(6)-羧基荧光素质量规格：0.955(6)-Carboxyfluorescein

TNFSF9 Protein Mouse 重组小鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (His 标签)5(6)-FAM, SE; 5(6)-羧基荧光素琥珀酯质量规格：>90%5(6)-FAM, SE

大鼠条纹神经元(RNs)(1×106) C6, 大鼠脑细胞 RattusS-腺苷-L-蛋氨酸;S-腺苷甲硫氨酸质量规格：BR,度>96%,干品腺苷蛋氨酸>49%S-adenosyl-L-mine (SAM)

人羊膜细胞;WISH5(6)-ROX ;5(6)-羧基-X-罗丹明盐酸盐质量规格：>95%,进分5(6)-Carboxy-X- rhodamine; 5(6)-ROX
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。