PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：伤寒沙门氏菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

5-Aminofluorescein  3326-34-9  中文名：5-氨基荧光素  分子式：C20H13NO5  度：98.0%  关键词：    小鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  119-79-9  中文名：5-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S  度：98.0%      小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

5-Amino-2-methylindole  7570-49-2  中文名：5-氨基-2-甲基吲哚  分子式：C9H10N2  度：98.0%  关键词：    小鼠抗内膜抗体(EMAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Amino-1-naphthol  83-55-6  中文名：5-氨基-1-萘酚  分子式：C10H9NO  度：98.0%  关键词：    小鼠复合物(LDL-IC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Amino-1-(2-hydroxyethyl)pyrazole  73616-27-0  中文名：  分子式：C5H9N3O  度：98.0%  关键词：    小鼠解脲脲原体抗体(UU-Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
同型半胱酸（Hcy）测定试剂盒（酶循环法）  4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone  2549-87-3  中文名：4-丙烯氧基-2-羟基二苯甲酮  分子式：C16H14O3  度：99.0%  关键词： 

铁蛋白   英文名称：   human Ferritin   规格：   48T/96T   英文缩写：   Fe  4-Acetamidophenol  103-90-2  中文名：对乙酰氨基酚  分子式：C8H9NO2  度：98.0%  关键词： 

铁测试盒   Iron test case  4-[2-[(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide  119018-29-0  中文名：  分子式：C16H21N3O4S  度：98.0%  关键词： 

调节活化蛋白   英文名称：   Human Raes   规格：   48T/96T   英文缩写：   RAES  4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester  155405-80-4  中文名：  分子式：C16H16N4O3  度：98.0%  关键词： 

甜菜碱含量测定试剂盒   可见分光光度法   50管/48样  4-[(4-Methylpiperazin-1-yl) methyl]benzoic acid di  106261-49-8  中文名：甲磺酸伊马替尼  分子式：C13H20Cl2N2O2  度：98.0%  关键词：
伤寒沙门氏菌PCR检测试剂盒直销PA-1细胞，人卵巢 Ad5DNA转化的胚肾,HEK-293细胞 心肌细胞Many types of cells包装：5 ×105方(1ml)TRIS,1M,pH8.0Tris溶液生物技术级透明无色液体RTsigma

山羊皮肤细胞;WGS1λ型角叉菜胶 λ-Carrageenan 9000-7-1 1G 通用试剂

S100B Others Human 人 S100B 人细胞裂解液 (阳性对照) 溴化金 GOLD(III) BROMIDq 1094-8-7

CL-00074T1(小鼠癌细胞)5×106cells/瓶×2etxylcaprate羊蜡酸乙酯100TCP，26.2%

EFNA5 Others Rat 大鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 人细胞裂解液 (阳性对照) 110-17-8富马酸;反二酸;;紫堇酸;1，2-二羧酸FuMaric Acid;Boletic acid;Lichenic acid;trans-1,2-etxylenedicarboxylic acid
THBD Others Rat 大鼠 Thrombomodulin / THBD 人细胞裂解液 (阳性对照) 曲扶胸甙，英文名或英文缩写：Trifluorothymidine，级别：高，98%，规格：1克

脑微内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)3-[(3-胆酰安炳基)二基安]-1-炳磺醋水合物 98% 3-((3-CHOLcMIDOPROPYL)DIMqTHYLcMMONIO)-& 3133-04-0

Raji细胞，人Butt`s瘤细胞 C57小鼠色素瘤瘤株,ME细胞 人肾近曲小管上皮细胞裂解物HRPTEpiCLBSALOWENODOTOXIN白蛋白,低内生物技术级白色至淡黄色粉末COLDsigma

NCI-H23(人非小细胞细胞) 5×106cells/瓶×2硼酸shēng huà shì jì容量：RT10克

CCD-1095Sk(人浸润性导管癌旁皮肤细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0078EL4(小鼠瘤细胞)5×106cells/瓶×2 615小鼠网织细胞性瘤株;L615Pronase 250mg/1g Roche分装
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。