【产品名称】: 罗斯河病毒PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Ross River Virus(RRV)RTPCR
【货号】: BKP4294

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

罗斯河病毒PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O    唾液酸（SA）测定试剂盒（带SA标准）（比色法）                 

4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  中文名：4-氨基-3-羟基苯甲酸  分子式：C7H7NO3    鸭子乙酰辅酶A羧化酶(ACC)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  中文名：4-氨基-3-羟基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S    鸭子酶(CA)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

4-Amino-3,5-dichloropyridine  中文名：  分子式：C5H4Cl2N2    鸭子苹果酸酶(ME)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S    鸭子球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
乳酸（lacticacid）测定试剂盒（测血清、组织等）（比色法）  Rhein  478-43-3  中文名：大黄酸  分子式：C15H8O6  度：98.0%  关键词： 

肉毒杆菌(E/F型)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T                 Withaphysalin A  57423-72-0  中文名：  分子式：C28H34O6 

肉毒杆菌(A/B型)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  Withaphysalin A  57423-72-0  中文名：  分子式：C28H34O6  度：98.0%  关键词： 

溶酶体相关膜蛋白3   英文名称：   Human Lysosomal Associated membrane protein 3   规格：   48T/96T   英文缩写：   LAMP3  3-Acetyl-2,5-dichlorothiophene  36157-40-1  中文名：  分子式：C6H4Cl2OS  度：98.0%  关键词： 

溶菌酶标准品   Standard for lysozyme                 Ranitidine   66357-59-3  中文名：盐酸雷尼替丁  分子式：C13H23ClN4O3S
PTX3 Others Human 人 PTX3 / TNFAIP5 人细胞裂解液 (阳性对照) Fmoc-Tyr(tBu)-OHFmoc-O-叔丁基-L-酪酸500克特，98.5%

BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.11,4-二肖基本;队二肖基本 1,4-bqnzqnq 9-94-4

NCR1 Others Rat 大鼠 NCR1 / NK-p46 人细胞裂解液 (阳性对照) 水合安嘌呤(-20℃) Mqthotrqxctq 1929-2-

原代神经胶质细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装：1mlDodecane正十二烷20毫克AR，98%

ECV-304细胞，人脐内皮(具有T24细胞特性) 金黄色葡萄球菌 人牙龈成纤维细胞总RNAHGF NA13007-92-6六羰基ChroMiuM hexacarbonyl
罗斯河病毒PCR检测试剂盒说明书EB (NBL-4)细胞，牛胚气管细胞 SW 1088[SW-1088; SW1088](人脑星型细胞) CM-H018人成纤维细胞完全培养基100mL镉黄，英文名或英文缩写：Cadmium sulfide，级别：AR，99.5%，规格：10克

EGF Protein Mouse 重组小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白鳞钼醋铵 cMMONIUM PHOSPHOMOLYBDcTq HYDRcTq 2473-94-3

MKN-28(人高转移细胞) 5×106cells/瓶×2 脑微内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)苄氧羰基甘酸，英文名或英文缩写：CBZ-L-Gly，级别：特，99%，规格：100克

上皮细胞培养基PEpiCMFORMALDEHYDE-FREERNAGELKIT无RNA胶试剂盒RTsigma

SELE Others Rat 大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 人细胞裂解液 (阳性对照) 3374-22-9DL-半胱酸;DL-2-基-3-;DL-半膀胱基酸;DL-β-;DL-脬基酸DL-Cysteine
PCR检测试剂盒

罗斯河病毒PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。