PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：鼻病毒PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene  中文名：4,4'-双(5-甲基-2-苯并恶唑基)芪  分子式：C30H22N2O2    口蹄疫病毒Asia-1亞型(FMDV-A1)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T              

4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene  中文名：4,4'-双(2-苯并恶唑基)芪  分子式：C28H18N2O2    鸭特定基因序列(Duck)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

4-(Phenylthio)benzyl alcohol  中文名：  分子式：C13H12OS    鸭特定基因序列(Duck)核酸检测试剂盒   48T

4-(N-Methyl)-aminoantipyrine  中文名：  分子式：C12H15N3O    鹅特定基因序列(Goose)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

4-(4-Fluorophenyl)-6-isopropyl-2-[(N-methyl-N-methylsulfonyl)amino]pyrimidinyl-5-yl-formyl  中文名：  分子式：C16H18FN3O3S    鹅特定基因序列(Goose)核酸检测试剂盒   48T
人周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)酶联吸附测定试剂盒   Human CDKN2A (Cyclin Depende Kinase Inhibitor 2A) ELISA Kit  2-Methyl-4-(2-methylbenzoylamino)benzoic acid  317374-08-6  中文名：  分子式：C16H15NO3 

人周期素依赖性激酶9(CDK-9)酶联吸附测定试剂盒   Human CDK9 (Cyclin Depende Kinase 9) ELISA Kit  2-Methyl-4-(2-methylbenzoylamino)benzoic acid  317374-08-6  中文名：  分子式：C16H15NO3  度：98.0%  关键词： 

人周期素依赖性激酶8(CDK8)酶联吸附测定试剂盒   Human CDK8 (Cyclin Depende Kinase 8) ELISA Kit  2-Hydroxytetracosanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C26H52O3  度：98.0%

人周期素依赖性激酶7(CDK-7)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Methoxystypandrone  85122-21-0  中文名：  分子式：C14H12O5  度：98.0%  关键词：  虎杖; 萘醌; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

人周期素依赖性激酶6(CDK6)酶联吸附测定试剂盒   Human CDK6 (Cyclin Depende Kinase 6) ELISA Kit  2-Iodo-3-oxo-4-azaandrostane-17-carboxylic acid  104239-97-6  中文名：  分子式：C19H28INO3  度：98.0%  关键词：
鼻病毒PCR检测试剂盒直销RK3 Others Mouse 小鼠 RK3 / kC 人细胞裂解液 (阳性对照) 磺胺二甲嘧啶质量规格：≥99%,BRSulfamethazine

小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3磺胺二甲嘧啶 （标准品）质量规格：≥99%,标准品Sulfamethazine

CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人细胞裂解液 (阳性对照) 糖精（标准品）质量规格：校准温度计用Saccharin

Caco-2，人结直肠腺癌细胞酚酞（标准品）质量规格：熔点测定Phenolphthalein

NEI-H209细胞，小细胞细胞 人细胞,22RV1细胞 人脉络丛成纤维细胞RNAHCPF miRNA5 μg磺胺（标准品）质量规格：检查Sulfanilamide
SLAMF6 Others Human 人 SLAMF6 / Ly108 人细胞裂解液 (阳性对照) L-盐酸半胱酸，英文名或英文缩写：L-Cysteine metxyl ester xy7nochloride，级别：BR，99%，规格：25克

CM-R082大鼠骨细胞完全培养基100mL加醋苄酯;蚁醋苄酯 Bqnzyl forMctq;ForMic ccid bqnzyl qstqr; 104-27-4

BSG823细胞，人细胞 人神经上皮瘤细胞,SK-N-SH细胞 瘤牛皮肤细胞;BIN-S1葡聚糖凝胶 Sephade... Sephadex G-100 Medium 9050-94-6 25G 分离试剂

CNE(人细胞) 5×106cells/瓶×2ABTSdiammoniumsalt2,2'-连氮基-双-(3-乙基本并二氢噻唑啉-6-磺酸)二盐5克超，98%

FCGR3B Others Human 人 CD16b / FCGR3B 人细胞裂解液 (阳性对照) (顺二酸钠(马来酸钠))
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。