PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：猪副粘病毒PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

3-(3-Chloropropyl)-1,3-dihydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one  85175-59-3  中文名：  分子式：C15H18ClNO3  度：98.0%  关键词：    小鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

3-(1-Piperazinyl)-1,2-benzisothiazole  87691-87-0  中文名：  分子式：C11H13N3S  度：98.0%  关键词：    小鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装         

2''-O-Acetylsprengerinin C  1220707-33-4  中文名：  分子式：C46H72O17  度：%  关键词：  麦冬; 螺甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠基质细胞衍生因子-1(mouse SDF-1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

2-n-Propyl-4-methyl-6-(1-methylbenzimidazole-2-yl)benzimidazole  152628-02-9  中文名：  分子式：C19H20N4  度：98.0%      小鼠基质细胞衍生因子-1a(mouse SDF-1a)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

2-Naphthyl N-benzoylphenylalaninate  15873-25-3  中文名：2-萘基N-苯甲酰基苯丙氨酸酯  分子式：C26H21NO3  度：98.0%      小鼠基质细胞衍生因子-1R(mouse SDF-1R)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装
口蹄疫病毒Asia-1亞型(FMDV-A1)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T                 Phenformin   834-28-6  中文名：盐酸苯乙双胍  分子式：C10H16ClN5 

空肠弯曲菌(CJ)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  Trazodone   25332-39-2  中文名：盐酸曲唑酮  分子式：C19H23Cl2N5O  度：98.0%  关键词： 

可溶性内皮细胞蛋白 C 受体 (sEPCR)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     3β,5α-Dihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  中文名：  分子式：C28H44O3 

可溶性内皮生长因子受体1   英文名称：   Human Soluble Fms-like Tyrosine Kinase 1/sVEGFR1   规格：   48T/96T   英文缩写：   SFLT1  Paroxetine   78246-49-8  中文名：盐酸帕罗西汀  分子式：C19H21ClFNO3 

可溶性内皮生长因子受体1   英文名称：   Human soluble Fms.liketyrosinekinase Receptor 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   sFLt-1  Paroxetine   78246-49-8  中文名：盐酸帕罗西汀  分子式：C19H21ClFNO3  度：99.0%
猪副粘病毒PCR检测试剂盒供应TMEM27 Others Human 人 TMEM27 人细胞裂解液 (阳性对照) 酸性绿 50 质量规格：BS,进口原装Lissamine™ Green B

软骨细胞培养基CM酸性绿A质量规格：BS,>97%,进口分装Acid Green A

C-33A细胞，人子细胞 兔主动脉平滑肌细胞,CCC-SMC-1细胞 人表皮角质细胞-胎儿HEK-f焦1酸钾(>97%,BC)质量规格：>97%,BCPotassium pyrophosphate, tetrabasic

HFSF(人胚胎眼巩膜成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2钨酸钾二水(>98%,BR)质量规格：>98%,BRPotassium tungstate, dehydrate

hMoCD14+-PB single donorpre-screened Pellet 人类外周血CD14+单核细胞团块单一来源，预选型 > 1 mio.cells 人脊髓星形胶质细胞RNAHA-sp miRNA5 μg硫酸奎宁水合物(>98%,BR)质量规格：>98%,BRQuinine hemisulfate salt hydrate
杂交瘤(B类);Z51B3C10H12A12G2F7B5TES；Tris乙磺酸,2-[（三（羟甲基）甲基）氨基]-1-乙磺酸质量规格：>99%,ARTES

中国仓鼠卵巢细胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF 肥大细胞瘤细胞，P815细胞 INS-1细胞，大鼠胰岛素细胞3-[ (N-三(羟甲基)甲氨基]-2-羟基丙磺酸钠质量规格：>98%,BRTAPSO mono

293来源病毒包装细胞;ΦA-GPTAPSO；3-[ (N-三(羟甲基)甲氨基]-2-羟基丙磺酸质量规格：>99%,BRTAPSO

STIM1 Others Human 人 STIM1 / GOK 人细胞裂解液 (阳性对照) N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸钠质量规格：>99%,BRTAPS  Salt

神经元细胞Many types of cells包装：5 ×105方(1ml)S-I-G-S-L-A-K质量规格：>95%,BRS-I-G-S-L-A-K
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。