PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：猪肠道杯状病毒PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one  5751-20-2  中文名：  分子式：C5H6N2OS  度：98.0%  关键词：    小鼠可溶性E-选择素(mouse sE-Selectin/sCD62E)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  

2-Methylanthraquinone  84-54-8  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2  度：98.0%  关键词：    小鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  1975-51-5  中文名：  分子式：C8H7NO4  度：98.0%  关键词：    小鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

2-Methyl-4-(2-methylbenzoylamino)benzoic acid  317374-08-6  中文名：  分子式：C16H15NO3  度：98.0%  关键词：    小鼠基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

2-Methoxystypandrone  85122-21-0  中文名：  分子式：C14H12O5  度：98.0%  关键词：  虎杖; 萘醌; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
碱性蛋白酶测试盒   可见分光光度法   50管/24样  Tetracaine   中文名：盐酸丁卡因  分子式：C15H25ClN2O2 

碱性成纤维生长因子   英文名称：   basic fibroblast growth factor   规格：   48T/96T   英文缩写：   b-FGF  4,4'-Bis(diethylamino)benzophenone  90-93-7  中文名：四乙基米氏酮  分子式：C21H28N2O 

碱性0酸酶（AKP）检测   Acid phosphatase (ACP) detection  Polypodine B  中文名：水龙骨甾酮B  分子式：C27H44O8 

甲状腺球蛋白抗体   英文名称：   Human Thyroglobulin Aibody   规格：   48T/96T   英文缩写：   TGAb  Pefloxacin mesylate  70458-95-6  中文名：甲磺酸培氟沙星  分子式：C18H24FN3O6S 

甲型H5N1   英文名称：   Influenza A H5N1(Avian Flu) HA   规格：   48T/96T   英文缩写：   H5N1 HA  Prosapogenin A  19057-67-1  中文名：薯蓣次皂苷A  分子式：C39H62O12  度：%  关键词：  细胞毒活性; 麦冬; 螺甾烷; 甾苷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
猪肠道杯状病毒PCR检测试剂盒直销TNFRSF17 Others Human 人 TNFRSF17 / BCMA / CD269 人细胞裂解液 (阳性对照) 黄芪多糖(50%)质量规格：>50%2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole

小鼠胚胎成纤维细胞;3T6-Swiss albino黄芪多糖(30%)质量规格：>30%2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole

SAE1 Others Human 人 SAE1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 3-奎宁环酮盐酸盐质量规格：>98%3-Quinuclidinone HCl

QGY-7701, 人细胞伊索拉定质量规格：≥99%,BRIrsogladine

NSC，大鼠神经干细胞 人脑视神经细胞，Hs 683细胞 RF/6A(猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞)黄柏酮（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Obacunone
PDIA4 Others Human 人 ERP72 / PDIA4 人细胞裂解液 (阳性对照) Camphore2-莰酮100克CP，96%

C57BL/6小鼠骨髓间质干细胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cells苄基三基录化铵;三基下基录化铵 BqnzyltriMqthylcMMoniuM chloridq 26-93-9

HME6细胞，人色素瘤细胞 动物双歧杆菌 EB病毒转化的人B细胞;KMY0919 10B Naphthol Blue Black (for electrophores... 1064-48-8 5G 染色剂

UMR-106(大鼠细胞) 5×106cells/瓶×24-(对硝基本偶氮)-1-奈酚，英文名或英文缩写：4-(4-nitnopxenylazo)-1-naphthol，级别：高，50%，规格：5克

Hut-102(人皮肤T瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 SKOV3/Taxol-25, 人紫杉醇耐药细胞株 EB病毒转化的人B细胞;KMY1022MacerozymeR-10 1g/5g/10g/100g原装 Yakult.JAPAN
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。