PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：脑膜蠕虫PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

2,4-Dihydroxy-3-nitropyridine  中文名：  分子式：C5H4N2O4  度：98.0%  兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装        

6-Amino-1,3-dimethyluracil  中文名：  分子式：C6H9N3O2  度：98.0%  兔子氧化elisa试剂盒   兔子氧化试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子氧化试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子氧化试剂盒、兔子氧化eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Metoclopramide  中文名：甲氧氯普胺  分子式：C14H22ClN3O2  度：98.0%  兔子血小板因子4elisa试剂盒   兔子血小板因子4试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子血小板因子4试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子血小板因子4试剂盒、兔子血小板因子4eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Amiodarone   中文名：盐酸胺酮  分子式：C25H30ClI2NO3  度：98.0%  兔子血小板衍生生长因子elisa试剂盒   兔子血小板衍生生长因子试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子血小板衍生生长因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子血小板衍生生长因子试剂盒、兔子血小板衍生生长因子eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Zidovudine  中文名：齐多夫定  分子式：C10H13N5O4  度：98.0%  兔子血小板活化因子elisa试剂盒   兔子血小板活化因子试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子血小板活化因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子血小板活化因子试剂盒、兔子血小板活化因子eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
Rat angiotensin conveing enzyme (ACE) ELISA Kit 大鼠紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒  2-Amino-5-chlorobenzophenone  中文名：2-氨基-5-氯二苯甲酮  分子式：C13H10ClNO 

Rat angiopoietin receptor Tie2 (ANG-R-Tie2) ELISA Kit 大鼠生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA试剂盒  1-Indanamine   中文名：  分子式：C9H12ClN 

Rat angiopoietin receptor Tie1 (ANG-R-Tie1) ELISA Kit 大鼠生成素受体Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA试剂盒  1-Methyl-3-nitrophthalate  21606-04-2  中文名：  分子式：C9H7NO6 

Rat angiopoietin 4 (ANG-4) ELISA Kit 大鼠生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒  1-Methyl-5-amino-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C14H19N3O2 

Rat angiopoietin 2 (ANG-2) ELISA Kit 大鼠生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒  1-Methyl-aminomethyl naphthalene  14489-75-9  中文名：  分子式：C12H13N
脑膜蠕虫PCR检测试剂盒直销动物上皮细胞生长添加物-aEpiCGS-2-a盐酸头孢他美酯(标准品)质量规格：效价测定Cefetamet pivoxil hydrochloride

荷兰白花奶牛牛肺细胞;DCL1 ，SPA-A1细胞 SCaBER(膀胱鳞癌细胞)L-生物喋呤质量规格：>98%,BRL-Biopterin

EB病毒转化的人B细胞;KM0501渥曼青霉素质量规格：>98%,美国进口,PI3K/AKT通路的抑制剂Wortmannin

FZD5 Others Human 人 Frizzled-5 / FZD5 人细胞裂解液 (阳性对照) 溴化新斯的明质量规格：>98%Neostigmine bromide

Ca Ski, 人细胞盐酸头孢卡品酯质量规格：JP;722~764μg/mgCefcapene pivoxil HCl
T24, 人细胞 胚癌细胞,Pcc4细胞 NCI-H1299(人细胞)十一醛shēng huà shì jì容量：25克

绿色荧光蛋白标记小鼠子细胞;U14-GFP2，6-二录醌-4-录亚安 2,6-Dichloroinoneonq-4-chloroimidq 101-38-

FGFR3 Others Mouse 小鼠 FGFR3 / CD333 人细胞裂解液 (阳性对照) 四甘醇，英文名或英文缩写：TEG，级别：AR，98.5%，规格：5克

人皮肤成纤维样细胞;HSF2葡萄球菌选择性琼脂shēng huà shì jì容量：1克

人肠平滑肌细胞(HISMC)( 5×105 )7752-82-12-基-5-溴嘧啶2-Amino-5-bromopyrimidine
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。