PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：副球孢子菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

2-(Chloromethyl)-4-methylquinazoline  109113-72-6  中文名：  分子式：C10H9ClN2    兔6素F1a(6-keto-PGF1a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

3-(Boc-Amino)piperidine  309956-78-3  中文名：  分子式：C10H20N2O2    兔素B2(TXB2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Linagliptin  668270-12-0  中文名：利拉利汀  分子式：C25H28N8O2    兔内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISAkit   ELISA.   96T/48T

Telmisartan tert-butyl ester  144702-26-1  中文名：  分子式：C37H38N4O2    兔血纤蛋白原(Fbg)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Fluoronaphthalene  321-38-0  中文名：  分子式：C10H7F    吐温80   100ml
PlasmidMaxiKit   10T                 Uzarigenin digitaloside  61217-80-9  中文名：  分子式：C30H46O8 

PlanNAplus   40ml  Uzarigenin digitaloside  中文名：  分子式：C30H46O8 

PH值快速测试盒   PH quick test case                 Ranitidine  66357-35-5  中文名：雷尼替丁  分子式：C13H22N4O3S 

PH精密试纸   PH precision test paper                 Risperidal  106266-06-2  中文名：利培酮  分子式：C23H27FN4O2 

PH广范试纸   PH wide range test paper  Risperidal  106266-06-2  中文名：利培酮  分子式：C23H27FN4O2  度：98.0%  关键词：
副球孢子菌PCR检测试剂盒直销平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)牛磺熊去氧胆酸质量规格：≥97%Tauroursodeoxycholic Acid Dihydrate

SKOV-3/DDP细胞，顺铂耐药株 人细胞,Ovary细胞 人真皮微内皮细胞cDNAHDMEC cDNA牛磺熊去氧胆酸钠质量规格：≥97%Tauroursodeoxycholic Acid  Salt

猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞;RF/6A新生霉素钠盐质量规格：>90%,进分Novobiocin

TNFRSF14 Others Human 人 TNFRSF14 / HVEA / HVEM 人细胞裂解液 (阳性对照) 磺胺甲基嘧啶(标准品)质量规格：>98%,分析标准品Sulfamerazine

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1脱羧环丙沙星质量规格：Decarboxy Ciprofloxacin
MDK Protein Human 重组人 Midkine / MDK 蛋白T4DNA聚合酶5克

人胚胎心肌组织来源细胞;CCC-HEH-2 人小气道上皮细胞完全培养基 100mL丁香油;丁子香油 Clovq oil 8000-34-8

人细胞;5637(HTB-9)安区南 cztrqoncM 78110-38-0

F3 Others Rat 大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 人细胞裂解液 (阳性对照) 录化1公斤

骨髓间质干细胞 Adult bone marrow mesenchymal stem cellsChlorampxenicol 5g/25g原装/100g原装 INALCO1758-9321
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。