PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：绵羊病毒2型PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

2-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)propane-1,2-diol  129141-48-6  中文名：  分子式：C8H16O4  度：98.0%  关键词：  植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

1-Testosterone  1965/6/5  中文名：1-睾酮  分子式：C19H28O2  度：98.0%  关键词：    小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装        

1-O-Methylnataloe-emodin  103392-51-4  中文名：  分子式：C16H12O5  度：98.0%  关键词：  植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠固   英文名称：   Aldosterone   规格：   48T/96T   英文缩写：   ALD

1-Naphthol  90-15-3  中文名：  分子式：C10H8O  度：96.0%      小鼠白蛋白   英文名称：   Albumin   规格：   48T/96T   英文缩写：   ALB

1-Monopalmitin  542-44-9  中文名：1-棕榈酸单甘油酯  分子式：C19H38O4  度：98.0%  关键词：  中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠乙酰辅酶A羧化酶   英文名称：   Mouse Acetyl Coenzyme A Carboxylase   规格：   48T/96T   英文缩写：   ACC
L-Isoleucine   50g                 Vildagliptin  274901-16-5  中文名：维达列汀  分子式：C17H25N3O2 

Lipopolysaccharides,Escherichiacoli055:B5  Vildagliptin  中文名：维达列汀  分子式：C17H25N3O2 

Lectin,fromiticumvulgaris                    Trenbolone heptanoate  N  中文名：  分子式：C25H34O3 

Lectin,fromArachisHypogaea(pean)  Trenbolone heptanoate  中文名：  分子式：C25H34O3 

Kisser封片液   10ml  Anthraquinone  中文名：蒽醌  分子式：C14H8O2  度：98.0%
绵羊病毒2型PCR检测试剂盒供应家猫肺细胞;FCA-L1 羊膜细胞，Ha Fe细胞 BaF3细胞，小鼠原B细胞株香蜂草苷(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Isosakuranetin 7-O-rutinoside

人正常上皮细胞;MCF 10A盐酸萘替芬（标准品）质量规格：含量测定Naftifine Hydrochloride

PRLR Others Mouse 小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) 碳酸钙（标准品）质量规格：含量测定Calcium carbonate

原代神经元细胞特制基础培养基Many types of cells包装：500/250/100ml甲磺酸氨氯地平（标准品）质量规格：含量测定Amlodipine mesylate

CD40LG Others Human 人 CD40L / CD154 / TNFSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) 曲克芦丁（标准品）质量规格：HPLC法含量测定Troxerutin
CDNF Others Mouse 小鼠 CDNF / ARMETL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 对录本酸，英文名或英文缩写：PCBA，级别：BR，99%，规格：50毫克

人结直肠腺癌细胞;COLO 320DM [COLO320DM](-)-二异蒎基录硼完 (-)-Diisopinoccmphqyl chloroborcnq 82116-37-6

CCDC47 Others Human 人 CCDC47 人细胞裂解液 (阳性对照) L-(+)-本甘安醋 L-Phqnylglycinq 932-32-2

人肝动脉平滑肌细胞完全培养基 100mLxlonofonm:ISOAMYLALCOHOL24:1录仿:异 24:1生物技术级950MLRT

P815细胞，小鼠肥大细胞癌细胞 V79-4(中国仓鼠肺细胞) 非洲绿猴肾细胞系/HCV-C;Vero-HCV-CN-芴甲氧羰酰基-D-色酸NA
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。