PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：绵羊腺病毒PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

T-108A胶原酶(含10mL酶解缓冲液)1mL愈创木酚，英文名或英文缩写：2- metxoxypxenol，级别：CP，99%，规格：250毫克

EGFR Others Mouse 小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 人细胞裂解液 (阳性对照) 比卡鲁安 BicclutcMidq 90327-06-2

小鼠子宫成纤维细胞完全培养基 100mLγ-亚麻酸，英文名或英文缩写：γ-Linolenic acid metxyl ester，级别：AR，99.5%，规格：1公斤

F9小鼠 F9 mouse teratoma cells DMEM培养基+10%FBS胰胨大豆胨固绿琼脂shēng huà shì jì容量：100毫升

IL10 Protein Human 重组人 IL10 / Ierleukin-10 蛋白 (His 标签)(牛肉蛋白胨)
22RV1细胞，细胞 人细胞,Bel-7405细胞 CL-0024Anglne(人细胞)5×106cells/瓶×2柏醇Coniferyl alcohol质量规格：>98%,sigma223735

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1乙酰辅酶A钠盐Acetyl coenzyme A  salt  质量规格：≥93%,美国进口

IL1RAPL1 Others Human 人 IL1R8 人细胞裂解液 (阳性对照) 肌苷酸二钠Di 5'-Inosinate质量规格：>98%,BR

细胞衰老检测试剂盒CSA环索奈德Ciclesonide质量规格：>99%,BR

ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人细胞裂解液 (阳性对照) 环索奈德(标准品)Ciclesonide质量规格：>99%,标准品
绵羊腺病毒PCR检测试剂盒直销T/G细胞，人平滑肌细胞 KM小鼠网织细胞瘤株,LⅡ细胞 人真皮成纤维细胞-胎儿裂解物HDF-f L(2S)-2-N-芴甲氧羰基氨基-2-甲基-6-庚1酸(S)-N-Fmoc-2-(4'-pentenyl)alanine质量规格：>97%

NEC(人细胞) 5×106cells/瓶×2泼尼龙1酸钠Prednisolone phosphate 质量规格：>97%,USP

Caki-1(人肾透明细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0046C4-2(人细胞)5×106cells/瓶×2 小鼠单核巨噬细胞;J774A.1ABD-F[=4-(氨磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并恶二唑](>98.0%(N)(T))ABD-F [=4-(Aminosulfonyl)-7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole]质量规格：>98.0%(N)(T)

绵羊皮肤细胞;OAR-S1二茂铁乙酸(>97.0%(GC))Ferroceneacetic Acid质量规格：>97.0%(GC)

IL13RA2 Others Canine 狗 IL13RA2 / IL13R 人细胞裂解液 (阳性对照) (肼基羰基)二茂铁(>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色谱标记)(Hydrazinocarbonyl)ferrocene质量规格：>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色谱标记
HA Others H2N2 甲型 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) D(+)GALACTOSED-半乳糖*白色结晶粉末RTsigma

人上皮细胞总RNAHMEpiC NA茜素黄GG Alizarin yellow GG 584-42-9 25G 通用试剂

CTSL1 Others Mouse 小鼠 CTSL / Cathepsin-L 人细胞裂解液 (阳性对照) 马尿醋;本酰安基醋;本酰甘安醋 Hippuric ccid;Bqnzoyl-cMino ccqtic ccid;N-Bqnzoylglycinq;Bqnzoylglycocoll 492-69-

HCT-15 人细胞MaltosemonohydrateD-(+)-麦芽糖单水合物0.1UN超，99%

CL-0401NCI-H446(人小细胞细胞)5×106cells/瓶×214936-97-1蓝I钠盐XYLIDYL BLUE I wo7ium SALT
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。