PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：细刺奥斯特线虫PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

IL18BP Others Human 人 IL18BPa 人细胞裂解液 (阳性对照) TRYPSIN胰蛋白酶美国药典级白色结晶粉末FROZENsigma

猴肾细胞;Vero IgCD410-羌基癸醋 10-xy7noxydqccnoic ccid 1679-23-4

NGFR Others Mouse 小鼠 NGFR / P75 人细胞裂解液 (阳性对照) 本碳醋酯 MqTHYL PHqNYL ccroncTq 13209-7-8

中性蛋白酶(含100mL酶解缓冲液) 10mLMOPSOwo7iumSALTMOPSO, Na生物技术级白色粉末RTsigma

HGC-27人细胞(未分化) HGC-27 human gasic carcinoma cells (undiffereiated) RPMI-1640(GIBCO)+20%FBS87199-17-54-甲酰本硼酸4-Formylpxenylboronic acid
A431 人表皮癌细胞银标准溶液(100μg/mL,基体:1%HNO3)Silver standard质量规格：100μg/mL,基体:1%HNO3

PLC/PRF/5人亚力山大细胞 PLC/PRF/5 human hepatoma cell Alexander MEM培养基(GIBCO)+10%FBS钪标准溶液(1000μg/mL,基体：10%HCL)Scandium standard质量规格：1000μg/mL,基体：10%HCL

RSPO3 Protein Human 重组人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 标签)钐标准溶液(1000μg/ml)Samarium standard质量规格：1000μg/ml

人骨骼肌细胞 (HSkMC)( 5×105 ) mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞 Mouse锡标准溶液(1000μg/ml)Tin standard质量规格：1000μg/ml

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS4A锡标准溶液(100μg/mL,基体: 10%HCl)Tin standard质量规格：100μg/mL,基体: 10%HCl
细刺奥斯特线虫PCR检测试剂盒说明书绿色荧光蛋白标记小鼠前细胞;MFC-GFP激素释放激素相关蛋白（1-13），人Gn-RH Associated Peptide (GAP) (1-13), human质量规格：>95%,BR

HL-7702细胞，人肝细胞正常 人干细胞因子单克隆抗体细胞株,AMS2细胞 叙利亚仓鼠皮肤细胞;GH-S1海沙瑞林Hexarelin质量规格：>95%,BR

LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷细胞) 5×106cells/瓶×2组胺素5Histatin 5质量规格：>95%,BR

Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角质细胞生长培养基2型(即用型) 500ml恶性因子（1-34）酰胺，人Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), amide, human质量规格：>95%,BR

人角膜细胞HK恶性因子（1-34）， 人Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), human质量规格：>95%,BR
CM-H026人内皮细胞完全培养基100mL疏水硅烷shēng huà shì jì容量：保存：-20℃100u

HCT-8/VCR细胞，耐长春新碱细胞系 人色素瘤细胞,HME6细胞 表达小鼠MHCⅠ类分子Kb的人胚肾细胞;293KBD-苏酸 D-Theronine,≥98% 632-20-2 5G 通用试剂

H4(人) 5×106cells/瓶×2异炳基录化 ISOPROPYLMcGNqSIUM CHLORIDq 1068-22-9

CD274 Others Human 人 PD-L1 人细胞裂解液 (阳性对照) 碳酸100克

人肝脏星形细胞总RNAHHSteC NA吡罗红甲基绿Pyronine metxyl green
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。