改良安卡拉痘苗病毒PCR检测试剂盒说明书【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

【产品名称】: 改良安卡拉痘苗病毒PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA)PCR
【货号】: BKP3998
组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

改良安卡拉痘苗病毒PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

EFNA1 Protein Human 重组人 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 标签)(S)-2-基-3-(4-咪唑基)，英文名或英文缩写：L-Histidine，级别：BR，99%，规格：10克

EJ(人细胞) 5×106cells/瓶×2 肺大平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)-2，4-二硝基... -2,4-DNPH 888-54-0 1ML 标准品

间充质干细胞脂肪细胞分化培养基MADM-prf二茂铁;环务二1铁 Fqrrocqnq;Biscyclopqntcdiqnyl iron;Di-2,4-cyclopqntcdiqn-1-yl iron 10-24-2

CDCP1 Others Mouse 小鼠 CDCP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 4,4'-Bipyridineγ,γ-联1克AR，99%

大鼠完全培养基 100mL10034-82-9wo7ium chromate tetrahydrate
GBP1 Others Human 人 GBP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 增甘1(>97.0%(T))Glycine-N,N-bis(methylenephosphonic Acid)质量规格：>97.0%(T)

木瓜蛋白酶(含10mL酶解缓冲液) 1mLN-甲基亚氨二乙酸(>98.0%(GC)(T))N-Methyliminodiacetic Acid质量规格：>98.0%(GC)(T)

PC9-EGFP-puro(慢病毒构建稳定株)人细胞 PC9-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in human lung cancer cells DMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin氮基三乙酸二钠盐(>99.0%(T))Nitrilotriacetic Acid Di Salt质量规格：>99.0%(T)

IL32 Protein Human 重组人 Ierleukin-32 / IL-32 蛋白 (isoform alpha, His 标签)N-(2-羧乙基)亚氨基二乙酸(>98.0%(T))N-(2-Carboxyethyl)iminodiacetic Acid质量规格：>98.0%(T)

人平滑肌细胞(HCSMC)(5×105 ) RLF, 大鼠成纤维细胞 Rattus三乙四胺-N,N,N',N'',N''',N'''-六乙酸(>98.0%(T))Triethylenetetramine-N,N,N',N'',N''',N'''-hexaacetic Acid质量规格：>98.0%(T)
SELE Others Rat 大鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人细胞裂解液 (阳性对照) 蛋白酶K(进分)Proteinase K质量规格：≥30units/mg protein,sigma分装

CM-H025人胰腺上皮细胞完全培养基100mL蛋白酶K(Sigma)Proteinase K质量规格：≥30units/mg protein,sigma原装

HuTu-80细胞，人十二指肠腺癌细胞 人色素瘤细胞,HME2细胞 人肝永生化细胞;THLE-3胰凝乳蛋白酶抑制剂Chymostatin质量规格：进分

H9c2(2-1) (大鼠心肌细胞) 5×106cells/瓶×2亮抑蛋白酶肽(进口)Leupeptin 质量规格：≥95%,进口半硫酸盐

CD80 Others Human 人 B7-1 / CD80 人细胞裂解液 (阳性对照) 胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制剂Pepstatin A microbial质量规格：≥90%,进分
改良安卡拉痘苗病毒PCR检测试剂盒说明书人平滑肌细胞裂解物HCSMCL肌酸，英文名或英文缩写：Creatine Monohydrate，级别：BR，99%，规格：25克

AMTN Others Human 人 AMTN / Amelotin 人细胞裂解液 (阳性对照) 1.2- 1,2-BUTcNqDIOL 284-03-

小鼠胚胎成纤维细胞;3T3-Swiss albino三氧化钼 Molybdqnum trioxidq 1313-7-2

tTA基因修饰的小鼠(B类);P19-CAG-tTA-1F3 弹性蛋白酶(含10mL酶解缓冲液) 1mL5-嶙酸吡哆醛，英文名或英文缩写：PLP，级别：IND，规格：5克

A549, 人细胞系 HumanEC肉汤EC BROTH FOR MICROBIOLOGY

PCR检测试剂盒

 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。