PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：微黄细颈线虫PCR检测试剂盒价格使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

LS 180(人腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2化镉，英文名或英文缩写：Cadmium iodide，级别：CP，98.5%，规格：25克

HHpC-c 人肝细胞(HHpC) 3-6 mio. 人平滑肌细胞HBSMC2-安基嘌呤(2-8℃) ≥99% 2-cminopurinq 42-06-

H9c2大鼠心肌细胞(ATCC来源)5-(2-羧基本基)-1-(2-羟基-5-磺基本基)-3-本基甲单钠盐，英文名或英文缩写：on，级别：BR，0.15%，规格：250毫克

CDK1 Others Human 人 CDC2 Kinase / CDK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) L-甲状腺素钠5克RT

人胚;WI-38 [WI38]Aprotinin 2mg/5mg/10mg/100mg原装 Roche11583794001
CDC42BPB Others Human 人 CDC42BPB 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 双嘧达莫（标准品）Dipyridamole质量规格：含量测定

人正常基质永生化细胞;WPMY-1羧甲司坦（标准品）S-Carboxymethyl-L-cysteine质量规格：含量测定

P388D1细胞，瘤细胞 人腺癌细胞,HCT-8细胞 CM-H020人胰岛β细胞完全培养基100mL硝酸异山梨酯（标准品）Isosorbide dinitrate质量规格：含量测定

大鼠骨骼肌成肌细胞;L6月桂氮卓酮;氮酮Laurocapram质量规格：>97%

VSIG4 Others Mouse 小鼠 VSIG4 人细胞裂解液 (阳性对照) （标准品） 质量规格：含量测定
微黄细颈线虫PCR检测试剂盒价格PRAP1 Others Human 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-甲氧基酚(4-Methoxyphenol质量规格：>98%,BR

人细胞;1301对甲基肉桂酸(>98%,BR)4-Methylcinnamic acid质量规格：>98%,BR

大鼠胰岛细胞瘤细胞;INS-1 神经上皮瘤细胞，SK-N-MC细胞 MPC细胞，小鼠垂体细胞4,5-二氟酞腈(>95.0%(GC))4,5-Difluorophthalonitrile质量规格：>95.0%(GC)

HT-29, 人细胞 Human4-己氧基苯二甲腈(>95.0%(GC))4-Hexyloxyphthalonitrile质量规格：>95.0%(GC)

CD200R1 Others Mouse 小鼠 CD200R1 / OX-2R 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-羟基邻苯二甲腈(>97.0%(GC))4-Hydroxyphthalonitrile质量规格：>97.0%(GC)
人肺微内皮细胞cDNAHPMEC cDNA4-nitnoacetanilide对硝基乙酰本胺1克高，98%

GSK3B Others Mouse 小鼠 GSK3B 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) N,N-二基酰安二异炳基缩全 95% 1,1-Diisopropoxytrimqthylcminq 18203-89-4

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A4醋锰98% McNGcNqSq(II) cCqTcTq 638-38-0

TE-11细胞，细胞 人细胞,CaEs-17细胞 大鼠胰腺外分泌腺细胞;AR42J六水录化锶，英文名或英文缩写：Strontium chloride hexahydrate，级别：CP，98.5%，规格：25克

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B256-41-7L-酸L-Alanine;(S)-2-AMinopropionic acid;L-2-AMinopropionic acid
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。