PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：同猪嵴病毒梅拉哥病毒PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

人浸润性导管癌旁皮肤细胞;CCD-1095SkTESBUFFERTES试剂级500G7365-44-8RT

Caki-1细胞，人肾透明细胞癌细胞 绿猴猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞,RF/6A细胞 CL-0414PC-3M-IE8(人高转移细胞株)5×106cells/瓶×2茴香脑 cnqtholq (cS) 4180/3/8

CRT(人神经细胞) 5×106cells/瓶×2nitnofurantoin硝呋妥因10克超，99%

hMNC-PB-c pooledula-pure 人单核细胞，来自外周血，混合来源，超 人微内皮细胞HCMEC复合基酸粉250毫克

GBC-SD, 人细胞apo-Transferrin 25mg/100mg/500mg原装 Sigma T4382
HB611(人细胞) 5×106cells/瓶×2 成纤维细胞培养基FM十二水合硫酸铁铵(>98%,BR)Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate质量规格：>98%,BR

肾系膜细胞Many types of cells包装：5 ×105方(1ml)钼酸铵四水Ammonium molybdate, tetrahydrate质量规格：>98%,BR

ADRBK1 Others Human 人 GRK2 / ADRBK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1钼酸铵(>96.5%,BR)Ammonium phosphomolybdate , hydrate质量规格：>96.5%,BR

杂交瘤(B类);Z153A2A5B3A121酸氢铵钠(>98%,BR)Ammonium  phosphate质量规格：>98%,BR

HUVEC细胞，人脐内皮细胞 人肝细胞正常,HL-7702细胞 CL-0072Daudi(人瘤细胞)5×106cells/瓶×2丁二酸铵(>98%,BR)Ammonium succinate质量规格：>98%,BR
同猪嵴病毒梅拉哥病毒PCR检测试剂盒说明书HS 683(人脑细胞) 5×106cells/瓶×2 生孢梭菌肌苷-5'-三1酸三钠盐ITP?Na3质量规格：>95%,BR

滑膜细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)鸟苷-5'-三1酸二钠盐GTP.Na2质量规格：>95%,BR

CNDP2 Others Mouse 小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 4,4'-二正辛氧基氧化偶氮苯(>95.0%(N))4,4'-Di-n-octyloxyazoxybenzene质量规格：>95.0%(N)

人髓母细胞瘤细胞;Daoy4,4'-二壬氧基氧化偶氮苯4,4'-Dinonyloxyazoxybenzene质量规格：

HMy2.CIR细胞，人B母细胞 人细胞,H7402细胞 CL-0200RWPE1(人上皮细胞)5×106cells/瓶×24'-(反-4-戊基环己基)二苯基-4-甲腈(>98.0%(GC))4'-(trans-4-Amylcyclohexyl)biphenyl-4-carbonitrile质量规格：>98.0%(GC)
PRLR Others Human 人 PRLR / Prolactin Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) 3,4-二羟基本酸100毫克

人内根壳细胞总RNAHHIRSC NA对基-α-D-吡... 4-Nitrophenyl α-D-galactopyranoside 7493-95-0 100MG 通用试剂

VEGFA Others Rat 大鼠 VEGF164 / VEGFA 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1 JP-TS cVIcTION FUqL 6474-47-8

中国仓鼠卵巢细胞-二氢叶酸还原酶缺陷型;CHO/dhFr-偶氮脒类引发剂V401克2～8℃

NCI-H460[H460]细胞，大细胞细胞 人,H4细胞 小鼠B细胞杂交瘤细胞;W6/322，4-二硝基扶本(剧毒)(阴凉)2,4-fluorobenzene
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。