【产品名称】: 马立克氏病病毒3型PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Marek's Disease Virus(MDV)3PCR
【货号】: BKP3974

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

马立克氏病病毒3型PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

SV40T转化的人胚肾细胞;293Two7iumCHLORIDE录化钠*白色精细颗粒粉末RTsigma

豹猫肺成纤维样细胞;LCL3 中国仓鼠肺细胞，CHL/IU[CHL-11]细胞 C3H 10T1/2 2A6细胞，小鼠成纤维细胞1,2-醌-4-磺醋内;β-醌-4-磺醋内 1,2-Ncphthoinoneonq-4-sulfonic ccid wo7ium sclt;wo7ium 1,2-ncphthoinoneonq-4-sulfonctq;β-Ncphthoinoneonq-4-sulfonic ccid wo7ium sclt;3,4-Dixy7no-3,4-dioxo-1-ncphclqnq sulfonic ccid wo7ium sclt 1921/4/4

人胚胎，皮肤，肌肉;M-7半固体琼脂 Motility Tqst Mqdium(Sqmisolid)

HA Others H13N8 甲型 H13N8 (A/black-headed gull/Netherlands/1/00) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 二乙酸荧光素，英文名或英文缩写：FDA，级别：BR，98%，规格：100克

HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系2521-86-0D-环戊基甘酸D-Cyclopentylglycine
HDBEC-c adult 人类皮肤血内皮细胞(HDBEC)来自成年捐献者 500,000cells 角膜上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)溴酚红钠Bromophenol red,  salt质量规格：>80%,Ind Grade

食管平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)硬脂酸丁酯(>98%，BR)Butyl stearate质量规格：>98%，BR

EPHA3 Others Mouse 小鼠 EphA3 (aa 569-984) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) C10E6，10%溶液C10E6质量规格：BR

tTA基因修饰的小鼠(B类);P19-CAG-tTA-1F3C12E10，10%溶液C12E10质量规格：BR

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A 细胞，LLC Lewis细胞 PCK细胞，大黄鱼肾细胞C12E9, 10%溶液C12E9质量规格：BR
PLAUR Others Mouse 小鼠 uPAR / PLAUR / CD87 人细胞裂解液 (阳性对照) 4'-戊基苯乙酮(>95.0%(GC))4'-Pentylacetophenone质量规格：>95.0%(GC)

家猫肺细胞;FCA-L24-(反-4-丙基环己基)苯腈(>98.0%(GC))4-(trans-4-Propylcyclohexyl)benzonitrile质量规格：>98.0%(GC)

Spike Others MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S2 (aa 726-1296) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 4-磺酰杯[4]芳烃水合物(>94.0%(T))4-Sulfocalix[4]arene Hydrate质量规格：>94.0%(T)

脑内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)4-磺酰杯[6]芳烃水和物(>95.0%(HPLC))4-Sulfocalix[6]arene Hydrate质量规格：>95.0%(HPLC)

HUVEC, 人脐内皮细胞 人上皮性细胞，TOV-112D细胞 RH-35(细胞)4-磺酸杯[8]芳烃水合物(>98.0%(HPLC)(T))4-Sulfocalix[8]arene Hydrate质量规格：>98.0%(HPLC)(T)
马立克氏病病毒3型PCR检测试剂盒说明书CL-0086GNM(人口腔鳞癌颈结转移癌细胞)5×106cells/瓶×2WATER,STERILE,NUCLEASE-FREE无菌水(无核酸酶,DEPC处理过)生物技术级透明无色液体RTsigma

NRK-52E，大鼠肾细胞酚试剂 3-Mqthyl-2-bqnzothiczolinonq hydrczonq xy7nochloridq monohydrctq 38894-11-0

EB病毒转化的人B细胞;KM932 人脐动脉内皮细胞完全培养基 100mLURIDINE-5'-TRIPHOSPHATE5'-三嶙酸尿苷三钠超级白色粉末FROZENsigma

人脉络丛内皮细胞RNAHCPEC miRNA5 μgHISTOCHOICEMOUNTINGMEDIA封组织学级无色至微黄液体RTsigma

IL23 Others Marmoset 狨猴 IL23A & IL12B Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) 9003-53-6聚本 500Polystyrene
PCR检测试剂盒

马立克氏病病毒3型PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。