PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：马秋博病毒PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

人胚肾细胞-F克隆;293F酸钾shēng huà shì jì容量：保存：-20℃1克

P3X63Ag8.653细胞，细胞 耐长春新碱细胞系,HCT-8/VCR细胞 CM-H028人内皮细胞完全培养基100mL2，2’-流基-二醇 2,2'-Thiodiqthcnol 111-48-8

正常大鼠肾细胞;NRK三油酸甘油酯shēng huà shì jì容量：RT100克

REG3A Others Mouse 小鼠 REG3A 人细胞裂解液 (阳性对照) 多聚赖酸shēng huà shì jì容量：RT10克

口腔角质细胞培养基OKM1760-24-3N-[3-(2-基乙基基)丙基]氧基硅烷N-[3-(Trimetxoxysilyl)propyl]etxylenediamine
HUASMC-c 人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC) 500,000cells 胃黏膜上皮Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)左旋肉碱盐酸盐(>98%,BR)L-Carnitine hydrochloride质量规格：>98%,BR

子宫内膜上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)左旋肉碱1酸盐(>99%,BR)L-Carnitine L-tartrate质量规格：>99%,BR

IL3 Others Human 人 IL-3 / Ierleukin-3 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 化(>98%,BR)Lead (II) iodide质量规格：>98%,BR

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1硬脂酸Lead (II) stearate质量规格：BR

3T3-Swiss albino细胞，胚胎成纤维细胞 人细胞,CRL细胞 CM-M048小鼠肠巨噬细胞完全培养基100mL硫酸(>99%,BC)Lead (II) sulfate质量规格：>99%,BC
马秋博病毒PCR检测试剂盒供应转化细胞 人卵巢成纤维细胞完全培养基 100mL丁草胺标准溶液(0.100mg/ml)Butachlor solution质量规格：0.100mg/ml

人脉络丛成纤维细胞RNAHCPF miRNA5 μg丁草胺(标准品)Butachlor质量规格：分析标准品,95%

KYNU Others Human 人 KYNU / Kynureninase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 丁草胺标准溶液(100μg/ml,u=4%)Butachlor solution质量规格：100μg/ml,u=4%

犬肾细胞;MDCK(NBL-2)丁草胺标准溶液(10μg/ml,u=7%)Butachlor solution质量规格：10μg/ml,u=7%

U-2 OS细胞，细胞 人二倍体细胞系,KMB-17细胞 小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3炔草隆(标准品)Buturon质量规格：分析标准品
F344大鼠骨髓间质干细胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells嶙酸三乙酯shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光25克

HME2细胞，人色素瘤细胞 干酪乳杆菌干酪亚种 人癌细胞;MCF7反式-4-氧基肉桂醋异忻酯 4-MqTHOXYCINNcMIC cCID 2-qTHYLHqXYL qSTqR 83834-29-7

USMC(大鼠平滑肌细胞) 5×106cells/瓶×2昆布多糖shēng huà shì jì容量：100克

IBRS-2(猪肾细胞) 5×106cells/瓶×2 Caki-1, 人肾透明细胞癌细胞 人细胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]HE琼脂500克

人胚;WI-38 [WI38]4472-41-7氘代二甲基价酰按N,N-DImetxYLfonmemi7e-D7
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。