PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：钩端螺旋体通用PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

人肺粘液上皮样癌细胞;NCI-H292甘油三油酸醋，英文名或英文缩写：Glycerol trioleate，级别：BR，97%，规格：5克

NK-92MI细胞，人恶性非霍奇金瘤患者的自然杀伤细胞 表达HBV病毒的人肝细胞,HepG2.2.15细胞 CL-0192RBL-2H3(大鼠嗜碱性细胞细胞)5×106cells/瓶×2流醋本安 cnilinq sulfctq 24-16-2

叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21CASPASE-3INHIBITORVIICASPASE-3 抑制剂 VII试剂级米白色固体COLDsigma

KIRREL Others Mouse 小鼠 KIRREL1 / NEPH1 人细胞裂解液 (阳性对照) 2,9-二甲基邻啰啉，英文名或英文缩写：Neocuproine，级别：CP，99%，规格：50克

角腊上皮细胞生长添加物CEpiCGS(蛋白酶抑制剂)
IL12B Others Human 人 IL12B / P40 人细胞裂解液 (阳性对照) 正十五烷（标准品）N-PENTADECANE质量规格：内标

猪细胞;ST咖啡酸乙酯（标准品）ETHYL CAFFEATE质量规格：含量测定

VEGFC Others Rat 大鼠 VEGFC / VEGF-C (aa 108-223) 人细胞裂解液 (阳性对照) 柠檬酸无水Citric acid质量规格：>99%,AR

人气管平滑肌细胞完全培养基 100mL柠檬酸无水（标准品）Citric acid质量规格：含量测定

OCM-1A细胞，人低侵袭性脉络膜色素素瘤细胞 绿色木霉 小鼠树突状细胞细胞;DCS硫酸钾（标准品）Potassium sulfate 质量规格：含量测定
钩端螺旋体通用PCR检测试剂盒说明书CLU Others Human 人 CLU / Clusterin 人细胞裂解液 (阳性对照) 氘代盐酸(50g)Deuterium Chloride质量规格：D, 99.5%  DCL 35% IN D2O

人成纤维细胞RNAHLF miRNA5 μg1酸-d3(100g )Phosphoric Acid-D3 (D, 99%)质量规格：D,99%

F13B Others Human 人 F13B / Coagulation factor XIII B chain 人细胞裂解液 (阳性对照) 氘代苯-D6(0.6ml x 10 )Benzene-D6质量规格：D,99.5%+0.05%TMS

U251 人神经细胞氘代苯-D6(0.5ml x 10 )Benzene-D6质量规格：D,99.5%

CL-0426RKO-E6(人转基因细胞)5×106cells/瓶×2氘代苯-D6(0.55ml x 10)Benzene-D6质量规格：D,99.5%+0.03%TMS
大鼠肝细胞瘤;H-4-II-EN-乙酰-D-色酸100克

SFPAC-1细胞，人细胞 人舌癌细胞系,Tca8113-P60细胞 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-D2α-溴代-γ-丁内酯 2-Bromo-4-butcnolidq 2061-1-

J82(人细胞) 5×106cells/瓶×2乙酰辅酶A25克

Promocell C-21070 Small Airway Epithelial CellGrowth Medium, 小上皮细胞生长培养基(即用型) 500ml盐酸奈乙二安5克

人脑膜细胞裂解物HMCL.6-二甲基2,6-Lutidine
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。