【产品名称】: 诺如病毒通用PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Norwalk Viruses(NV)RTPCR
【货号】: BKP4102

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

诺如病毒通用PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

AIMP1 Protein Mouse 重组小鼠 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白本甲酰三扶shēng huà shì jì容量：RT1克

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)(5×105) U266B1 [U266], 人细胞 Human井冈霉素 Validamycin 37248-47-8 5G 通用试剂

大鼠背脊髓神经元RN-dsc轻拂醋;拂轻醋 xy7nofluoric ccid

CD1B & B2M Others Human 人 CD1B & B2M Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) Tyrosinedecarboxylase酪酸脱羧酶25克BR，2500～7000u/mg，猪血

猕猴肌肉细胞;MMm7109-72-8丁基n-Butyllitxium
BPIFA2 Others Human 人 BPIFA2 / C20orf70 人细胞裂解液 (阳性对照) 物质P（1-9）Substance P (1-9)质量规格：>95%,BR

人食管上皮细胞完全培养基 100mL物质P（7-11）Substance P (7-11)质量规格：>95%,BR

7WML6.0细胞，人APP-PS1(M146L)双基因转染CHO细胞株 生孢梭菌 狗肺成纤维样细胞;DogL1TA-0910，他替瑞林TA-0910, taltirelin质量规格：>95%,BR

PPBP Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 标签)素，游离酸TRH, Free Acid质量规格：>95%,BR

NRK-52E(大鼠肾小管导管上皮细胞) 5×106cells/瓶×2 人 APCDD1 人细胞裂解液 (阳性对照) 尿皮质激素Ⅲ，小鼠Urocortin III, mouse质量规格：>95%,BR
IGSF3 Others Human 人 IGSF3 / EWI-3 人细胞裂解液 (阳性对照) 25-脱乙酰基利福平25-Desacetyl Rifampicin质量规格：美国进口

NCI-H1395 人L-缬氨酰胺盐酸盐L-Valinamide hydrochloride 质量规格：>98%,BR

Raw264.7, 小鼠单核巨噬细胞细胞半胱胺盐酸盐Cysteamine Hydrochloride质量规格：>99%,BR

LGALS1 Protein Human 重组人 Galectin-1 / LGALS1 蛋白甘氨酰胺盐酸盐Glycinamide hydrochloride质量规格：0.98

人肝细胞;QSG-7701 [QSG7701] 人上皮细胞完全培养基 100mLL-羟脯氨酸甲酯盐酸盐L-4-Hydroxyproline methyl ester hydrochloride质量规格：>98%,BR
诺如病毒通用PCR检测试剂盒说明书DU 145(人细胞) 5×106cells/瓶×24-本酚，英文名或英文缩写：4-Iodopxenol，级别：AR，99.5%，规格：5克

CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人细胞裂解液 (阳性对照) 啉 Morpholine,≥99.0%  100ML 通用试剂

人细胞;SF17L-环务基甘安醋 L-CYCLOPqNTYL GLYCINq 21-84-8

人脐带间叶干细胞(脐带)(HUMSC) (5×105)本酚红钠盐100克

CM-R008大鼠成纤维细胞完全培养基100mL83-46-5β-谷甾醇(含菜油甾醇)beta-Sitosterol
PCR检测试剂盒

诺如病毒通用PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。