【产品名称】: 诺卡菌PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Nocardia brasiliensisPCR
【货号】: BKP4090

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

诺卡菌PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

非洲绿猴肾细胞(SV40转化);COS-1 [COS1]盐酸鸟粪素，英文名或英文缩写：Guanine HC1，级别：BR，935ug/mg，规格：100KU

GZMH Others Human 人 Granzyme H 人细胞裂解液 (阳性对照) 言醋西替利嗪 Cqtirizinq xy7nochloridq 83881-2-1

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化);PC-12(高分化)RNASEA,PANCREATIC核糖核酸酶A*白色至浅棕色粉末FROZENsigma

人脑微内皮细胞 (HBMEC) ( 5×105 )STREPTAVIDIN链霉亲合素生物技术级5MG9013-20-1Frozen

肺平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)4-metxylumbelliferone 5g/10g/25g/100g原装 Sigma M1381
CCNE1 Others Mouse 小鼠 CCNE1 / Cyclin-E1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 桃叶珊瑚苷Aucubin质量规格：HPLC≥98%，标准品

神经小胶质细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)甲硝唑Metronidazole质量规格：>99%,BR

鲤鱼尾鳍细胞;YZ16 人皮肤基底细胞癌，TE 354.T细胞 Acc-2(涎腺腺样囊性癌细胞)甲硝唑(标准品)Metronidazole质量规格：HPLC>99%,标准品

人急性单核细胞细胞;THP-1乙酰哈巴苷8-O-Acetylharpagide质量规格：HPLC≥95%，标准品

ERBB3 Others Human 人 ErbB3 / HER3 人细胞裂解液 (阳性对照) 黄决明素Chrysoobtusin质量规格：HPLC≥98%，标准品
REG3B Others Mouse 小鼠 REG3B / Pap1 人细胞裂解液 (阳性对照) MG132,蛋白酶体抑制剂MG-132质量规格：>98%，proteasome抑制剂

非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4BPD184352 (CI-1040)PD-184352 (CI-1040)质量规格：>99%,MEK1/2抑制剂

NCI-H520细胞，人肺鳞癌细胞 小鼠间质细胞瘤细胞,MLTC-1细胞 CM-R023大鼠管内皮细胞完全培养基100mL2-脱氧-D-葡萄糖2-Deoxy-D-glucose质量规格：>98%,BR

QGY-7701(人细胞) 5×106cells/瓶×2坎地沙坦Candesartan质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养

Promocell C-28040 Pericyte Growth Medium, 周细胞生长培养基 500mlRuxolitinib(INCB018424) phosphateINCB018424) phosphate质量规格：>98%,JAK1/2抑制剂
诺卡菌PCR检测试剂盒说明书NCI-H209(人小细胞细胞) 5×106cells/瓶×2Hematinchloride血晶素25克IND

BNL CL.2(小鼠胚胎肝细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M046小鼠肠上皮细胞完全培养基100mL 人细胞;RPMI-8226 [RPMI8826]草酸酰胺乙酯 Ethyl oxamate,98% 617-36-7 25G 通用试剂

猕猴皮肤细胞;MMS4荧光速;荧光橙 Fluorqscqin;Dixy7noxyfluorcnq;Tqtrcoxyphthclophqnonqcn hydridq;C.I. 45350 1931-7-2

CD5 Others Rat 大鼠 CD5 人细胞裂解液 (阳性对照) (T-4)-双(D-葡萄糖酸-κO1,κO2)-锌，英文名或英文缩写：Zinc gluconate，级别：BR，98%，规格：5U

人肺微内皮细胞完全培养基 100mL硅酮　OV-225SILICONE OV-225
PCR检测试剂盒

诺卡菌PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。