PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：超级细菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

NCI-H2452(人间皮瘤细胞) 5×106cells/瓶×2球蛋白抗原鸡IgGshēng huà shì jì容量：RT50片/盒

CCL-149(大鼠肺泡上皮细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0086GNM(人口腔鳞癌颈结转移癌细胞)5×106cells/瓶×2 小鼠Lewis瘤株;LLT2,5-二肖基本酚(加约20%水湿润,本品干重约为5g) 2,5-PHqNOL 39-71-2

斑马鱼尾鳍细胞;AB.92-羟基-4-甲氧基，英文名或英文缩写：4-metxoxysalicylaldehyde，级别：BR，规格：50克

IL12B Others Mouse 小鼠 IL12B / IL-12B 人细胞裂解液 (阳性对照) 镍片shēng huà shì jì容量：RT10克

Hep 3B 人细胞103-81-12-本乙酰胺2-pxenylacetamide
CD3D Others Cynomolgus 食蟹猴 CD3d / CD3 delta 人细胞裂解液 (阳性对照) 酸枣仁皂苷D(标准品)Jujuboside D质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠管内皮细胞完全培养基 100mL伪原薯蓣皂苷Pseduoprotodioscin质量规格：HPLC≥98%，标准品

HCC-LM3人细胞 HCC-LM3 human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS氧化芍药苷,羟基芍药苷(标准品)Oxypaeoniflorin质量规格：HPLC≥98%，标准品

LRIG1 Protein Mouse 重组小鼠 LRIG1 / LIG-1 蛋白 (His 标签)3-异倒捻子素3-isomangostin质量规格：HPLC≥98%，标准品

SW1116(人腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 小肠隐窝上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)柚皮苷二氢查尔酮Naringin dihydrochalcone质量规格：HPLC≥98%，标准品
超级细菌PCR检测试剂盒说明书EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人细胞裂解液 (阳性对照) D-叔亮氨酸盐酸盐D-tert-Leucine hydrochloride质量规格：BR，98.5%

人卵巢;PA-1DTAC；十二烷基三甲基氯化铵Dodecyltrimethylammonium chloride(DTAC)质量规格：>99%,BR

猫肾细胞;F81 EB病毒转化的B细胞，CGM1细胞 CCC-SMC-2细胞，兔主动脉平滑肌细胞CTAC;十六烷基三甲基氯化铵CTAC质量规格：>99%

人恶性非霍奇金瘤患者的自然杀伤细胞;NK-92MI [NK92MI]十八烷基三甲基氯化铵Stearyl Trimethyl Ammoium Chloride(STAC)质量规格：>99%,BR

CD244 Others Human 人 2B4 / SLAMF / CD244 人细胞裂解液 (阳性对照) 十烷基三甲基氯化铵Decyltrimethylammonium chloride质量规格：>99%
人胚肺二倍体细胞;KMB-17wo7iumFORMATE酸钠*白色粉末RTsigma

HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 灿烂绿;亮绿;减性亮绿;盐沙绿 Brillicnt grqqn;DicMond grqqn G;qMqrcld grqqn crystcl;Mclcchitq grqqn G;C.I. 42040 633-03-4

CL-0306SMC-1(人胸膜瘤细胞)5×106cells/瓶×2二青 FF Xylene Cyanol FF (for molecular biolog... 2650-17-1 1G 染色剂

A673细胞，横纹肌癌细胞 人巨核细胞保细胞,Dami细胞 人恶性多发性;ERA-2D--TagatoseD-塔格糖250毫克BR，牡蛎提取

293T(人胚肾细胞) 5×106cells/瓶×2L-Mine 25g/100g/250g/Sigma5g 国产
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。