PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：奈瑟菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

肝内胆管上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)Glycogenfrombovineliver糖原九型100毫克超，99%

HA Others H9N2 甲型 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 布涤奈德 Budqsonidq 21333--3

人T瘤细胞Jurkat亚系;Jurkat77地衣红 Orcein (certified by the Biological St... 1400-62-0 1G 染色剂

豚鼠胚胎细胞;104C1 貂肺上皮细胞，Mv.1.Lu细胞 GT1-1细胞，小鼠细胞wo7iumchromatetetrahydrate四水二钠100克GR，99.5%

人肝细胞;QSG-7701 [QSG7701]对甲基本硫酚p-toluethiol
CL-00063T3-L1(小鼠胚胎成纤维细胞)5×106cells/瓶×2氧氟沙星N-氧化物醋酸盐(非对映)Ofloxacin N-Oxide Acetic Acid Salt (Mixture of Diastereomers)质量规格：美国进口

HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞盐酸阿巴卡韦Abacavir hydrochloride质量规格：美国进口

EB病毒转化的人B细胞;KM9803 人颅盖造骨细胞完全培养基 100mL硫酸阿巴卡韦Abacavir Sulfate质量规格：美国进口

杂交瘤(B类);Z51B3C10H12A12G2F7E7阿巴卡韦羧化物Abacavir Carboxylate质量规格：美国进口

PTPN11 Others Mouse 小鼠 SHP2 / PTPN11 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿巴卡韦5'-1酸盐Abacavir 5'-Phosphate质量规格：美国进口
奈瑟菌PCR检测试剂盒直销Acc-3细胞，涎腺腺样囊性癌细胞 人细胞,BSG823细胞 犬胸腺细胞;cf2Th苯噻啶Pizotifen质量规格：美国进口

tTA基因修饰的小鼠(B类);P19-CAG-tTA-1D3普伐他汀Pravastatin质量规格：美国进口

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-α-羟基普伐他汀内酯3α-Hydroxy Pravastatin Lactone质量规格：美国进口

人骨骼肌细胞HSkMC3-α-羟基普伐他汀钠盐3α-Hydroxy Pravastatin  Salt质量规格：美国进口

CSF2 Others Mouse 小鼠 GM-CSF / CSF2 人细胞裂解液 (阳性对照) (S)-3’’-羟基普伐他汀钠盐(S)-3’’-Hydroxy Pravastatin  Salt质量规格：美国进口
CL-0431RT4(人膀胱移行细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2正戊100克RT，避光

人细胞;Hela S3 [HeLaS3] 大鼠大隐平滑肌细胞完全培养基 100mL言醋录普鲁卡应 Chloroproccinq xy7nochloridq 3828-89-7

AtT20 小鼠细胞阿拉伯树胶粉 Gum arabic from acacia tree 9000-1-5 100G 通用试剂

VSIG4 Others Human 人 VSIG4 人细胞裂解液 (阳性对照) 肌动蛋白(广谱)阳性对照片100克RT

人癌细胞;MDA-MB-435S(1,4-Dithioerythritol)
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。