产地 | 进口、国产 |
品牌 | 帛科 |
货号 | BKP4061 |
用途 | 公司产品仅用物科研 |
包装规格 | 50次 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
是否进口 | 是 |
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μ进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
丝状支原体丝状亚种型PCR检测试剂盒直销 | Mycoplasma mycoides subsp(mycoides SC)SCPCR | BKP4061 |
技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
特点优势:
1. 特异性:丝状支原体丝状亚种型PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过GenBank及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到100%。
2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为100%。
3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1:序列资源丰富,除GenBank公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6. 优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
孔雀绿1酸盐检测试剂盒MGmP固红GG盐shēng huà shì jì容量:1克
PDCD1 Others Rat 大鼠 PD1 / PDCD1 人细胞裂解液 (阳性对照) 2’,3’,4’-三氧基本同 2,3,4-Trixy7noxybqnzophqnonq 1143-7-
人红系细胞;TF-1十八醇shēng huà shì jì容量:1克
杂交瘤(B类);C3110D2B2 细胞,DU145细胞 H4-ⅡE细胞,大鼠细胞48孔细胞培养板1毫克 保存:-20℃
WM451, 人色素瘤细胞 Human9006-59-1卵蛋白片ALBUMIN, HORSE
CM-H027人成纤维细胞完全培养基100mL左旋氨氯地平/苯磺酸左旋氨氯地平(S)-Amlodipine质量规格:>97%
SKOV3/Taxol-25, 人紫杉醇耐药细胞株左旋氨氯地平/苯磺酸左旋氨氯地平(标准品)(S)-Amlodipine质量规格:含量测定
人细胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS] 大鼠肺平滑肌细胞完全培养基 100mL曲尼司特Tranilast质量规格:>98.0%
子宫内膜上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)曲尼司特(标准品)Tranilast质量规格:≥98%,标准品
CD53 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD53 (aa 107-181) 人细胞裂解液 (阳性对照) 头孢羟氨苄 (标准品)CEFADROXIL质量规格:HPLC含量测定用
丝状支原体丝状亚种型PCR检测试剂盒直销3T6-Swiss albino细胞,胚胎成纤维细胞 人细胞,CaPan-Ⅱ/Capan-2细胞 CM-M040小鼠肝窦内皮细胞完全培养基100mL丁胺卡那霉素无水Amikacin质量规格:效价:>900 u/mg
正常大鼠肾细胞;NRK氨茶碱(>98%,BR)Aminophyllin hydrate质量规格:>98%,BR
CDH6 Others Human 人 CDH6 / KCAD 人细胞裂解液 (阳性对照) 柠檬酸铋铵Ammonium bismuth , hydrate质量规格:BR
人脉络丛成纤维细胞cDNAHCPF cDNA溴化铵(>99%,BR)Ammonium bromide质量规格:>99%,BR
KLK7 Others Mouse 小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 人细胞裂解液 (阳性对照) 化铵(>99%,BR)Ammonium iodide质量规格:>99%,BR
EFNA4 Protein Human 重组人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白 (Fc 标签)D-pxenylglycineetxylesteroHCl(R)-α-基乙酯氢录化物5克BR,98%
U251(人细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纤维细胞;C3H 10T1/2 2A6灿烂皇 BRILLIcNT YqLLOW 3021-11-4
人肾近曲小管上皮细胞裂解物HRPTEpiCL3,3',5,5'-四甲基联... 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine (≥99%,... 54827-17-7 100MG 染色剂
HA Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) Decyltrimetxylammoniumbromide(1-癸基)基溴化5克超,99%
小鼠瘤细胞(NK靶细胞);YAC-1L-LysineHCl 100g/250g/Sigma25g 国产
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数*个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。