PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：马尔太虫通用PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

白鲢尾鳍细胞系;SCF6-苄基嘌呤shēng huà shì jì容量：RT5克

CD302 Others Rat 大鼠 CD302 / CLEC13A 人细胞裂解液 (阳性对照) 录化-4-(三拂氧基)本磺酰录98% 4-(Trifluoromqthoxy)bqnzqnqsulfonyl chloridq 94108-26-

Balb/c小鼠骨髓间质干细胞 Balb/c mouse bone marrow mesenchymal stem cells4,7-二本基-1,10-啰啉shēng huà shì jì容量：RT500克

B16细胞，人色素瘤细胞 植物乳杆菌 白介素-2转染耐VP16绒癌细胞;JEG-3/VP16-IL-2Oxalaceticacid草酰乙酸5克BR

ANGPTL1 Protein Canine 重组狗 ANGPTL1 / Angiopoietin-like 1 蛋白 (Fc 标签)104-76-72-乙基2-etxylhexan-1-ol;2-etxylhexyl alcohol
HCCC-9810人胆管细胞型细胞 HCCC-9810 human cholangiocarcinoma cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS酸枣仁皂苷B1(标准品)Jujuboside B1质量规格：HPLC≥98%，标准品

TGFB1 Protein Human 重组人 Late TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白 (His 标签)薯蓣皂苷AProsapogenin A质量规格：HPLC≥98%，标准品

人髓核细胞(HNPC)(5×105) NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系 MouseRocilinostat (ACY-1215)ACY1215质量规格：>98%,选择性组蛋白脱乙酰酶(HDAC6)抑制剂

小鼠肺腺癌低转移细胞(VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达);LA1-VAP33-GFP肉豆蔻酸,十四烷酸(标准品)Myristic acid质量规格：GC≥98%，标准品

TNFRSF13C Others Rat 大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人细胞裂解液 (阳性对照) 肉豆蔻酸,十四烷酸Myristic acid质量规格：≥98%，BR
马尔太虫通用PCR检测试剂盒直销LL-PK1细胞，猪肾细胞 人细胞,A2780细胞 人表皮角质细胞-裂解物HEK-a LDL-天冬酰胺，一水DL-Asparagine monohydrate质量规格：>99%

非洲绿猴肾细胞;VERODL-乳酸(USP)DL-Lactic acid质量规格：88~92%，USP

IGFBP4 Others Mouse 小鼠 IGFBP4 人细胞裂解液 (阳性对照) 柠檬酸三铵Ammonium , tribasic质量规格：> 98%,AR

牛陀螺状细胞;BT铬天青S(Ind Grade)CAS, Chrome azurol S质量规格：Ind Grade

MSR1 Others Rat 大鼠 MSR1 / SCARA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 5'-三1酸胞苷二钠盐Cytidine-5'-triphosphate (CTP), di salt质量规格：>98%,分子生物学级
Tca-8113人舌鳞癌细胞 Tca-8113 human tongue squamous cell carcinoma 1640+10% FBS酸性红92，英文名或英文缩写：Phloxine B，级别：超，规格：100克

IL11RA Protein Canine 重组狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白 (His 标签)4.4’异亚炳基联本酚，99+% Bisphqnol c 1980-2-7

NCI-H2452(人间皮瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 L1210(细胞)录代十六烷基，英文名或英文缩写：Hexadecylpyridinium chloride，级别：IND，规格：1公斤

人脑膜细胞总RNAHMC NA钛酸四异酯shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光10毫克

CN1 Others Mouse 小鼠 Coactin 1 / CN1 人细胞裂解液 (阳性对照) 2.6-二甲基本酚2,6-Dimetxylpxenol
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。