PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：曼氏杆菌通用PCR检测试剂盒PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

FLT1 Others Human 人 FLT1 / VEGFR1 人细胞裂解液 (阳性对照) 1-奈酚100毫克

CCD-18Co 正常人组织细胞沉香油醇 Linalool,97% 78-70-6 25ML 通用试剂

CL-0062CHO-K1(仓鼠卵巢细胞亚株)5×106cells/瓶×2乳糖 Lcctosq stcndcrd 10039-6-6

NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系微量可调移液器P2.51克

EB病毒转化的人B细胞(傣族);KM9405 人大隐平滑肌细胞完全培养基 100mL7440-5-3PalladiuM
HEL(人红白细胞细胞) 5×106cells/瓶×2炔雌醇17-β-D-葡萄糖苷酸Ethynyl Estradiol 17-β-D-Glucuronide质量规格：美国进口

hMSC-UC-c 从脐带基质提取的的人类间质干细胞(hMSC-UC) 500,000cells 大鼠小胶质细胞RM炔雌醇3-醋酸盐Ethynyl Estradiol 3-Acetate质量规格：美国进口

小鼠骨髓细胞;FDC-P1β-雌二醇 3-(β-D-葡萄糖苷酸)钠盐β-Estradiol 3-(β-D-glucuronide)  salt质量规格：美国进口

MERTK Others Mouse 小鼠 MERTK / MER 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-羟基炔雌醇2-Hydroxy Ethynyl Estradiol质量规格：美国进口

MDA-MB-415 人腺癌细胞4-羟基炔雌醇4-Hydroxy Ethynyl Estradiol质量规格：美国进口
曼氏杆菌通用PCR检测试剂盒PCR检测试剂盒说明书大鼠肾小球系膜细胞;HBZY-1亥茅酚苷（标准品）Sec-O-Glucosylhamaudol质量规格：HPLC≥97%，标准品

RK1 Others Human 人 kA / RK1 人细胞裂解液 (阳性对照) D-谷氨酸D-Glutamic acid质量规格：0.98

平滑肌细胞培养基SMCMTLCK(进分)Nα-Tosyl-L-lysine chloromethyl ketone HCl质量规格：进分,sigma T7254

AMBP Others Human 人 AMBP / Alpha 1 microglobulin 人细胞裂解液 (阳性对照) 甘氨酰-L-酪氨酸；甘洛二肽Glycyl-L-tyrosine质量规格：>98%,BR,水合物

人肝细胞;QSG-7701 [QSG7701]D-亮氨酸D-Leucine质量规格：>98%,BR
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS4B 小鼠L6565克隆细胞系，L6565细胞 RTG细胞，鲑鱼胚胎细胞西立伐他汀内酯质量规格：美国进口Cerivastatin Lactone

人胚胎肌肉组织来源细胞;CCC-HSM-2去甲基西立伐他汀钠盐质量规格：美国进口Desmethyl Cerivastatin,  Salt

PVR Others Rat 大鼠 PVR / CD155 / NECL5 人细胞裂解液 (阳性对照) 羟基西立伐他汀钠盐质量规格：美国进口Hydroxy Cerivastatin  Salt

视网膜muller细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)去甲基羟基西立伐他汀钠盐质量规格：美国进口Desmethyl Hydroxy Cerivastatin  Salt

CD96 Others Human 人 CD96 人细胞裂解液 (阳性对照) 氨芬酸钠(标准品)质量规格：含量测定Amfenac
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。