PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：伊氏李斯特菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S1桔汁琼脂25毫升

IL1A Others Human 人 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-炔基-N,N-二基本安 4'-DIMqTHYLcMINOPHqNYL cCqTYLqNq 17273-94-3

恒河猴肾细胞;RM-21-溴代辛烷1克

CDCP1 Others Cynomolgus 食蟹猴 CDCP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-shēng huà shì jì容量：RT1克

CL-0254A-498(人细胞)5×106cells/瓶×2(尿嘧啶)
IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人细胞裂解液 (阳性对照) 异鼠李素(标准品）Isorhamnetin质量规格：HPLC≥98%,标准品

虹膜色素上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(标准品)Isorhamnetin-3-O-β-D-Glucoside质量规格：HPLC≥98%，标准品

Coc2细胞，细胞 人细胞,OVAC细胞 人少突胶质前体细胞(悬浮生长)cDNAHOPC-os cDNA异鼠李素-3-O-新橙皮苷(标准品)Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside质量规格：HPLC≥98%，标准品

非洲绿猴肾细胞;CV-1异土木香内酯（标准品）Isoalantolactone质量规格：HPLC≥98%，标准品

ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人细胞裂解液 (阳性对照) 异乌药内酯/异乌药内酯（标准品）Isolinderalactone质量规格：HPLC≥98%，标准品
伊氏李斯特菌PCR检测试剂盒说明书大鼠小神经胶质细胞(RM)(5×105)赤芝酸ELucidenic acid E质量规格：HPLC≥97%

非洲绿猴肾细胞;CV-1利克飞龙Licofelone质量规格：>99%,BR

KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株;G422 小鼠膀胱成纤维细胞完全培养基 100mL灵芝1酸CGanoderenic acid C质量规格：＞95.0%（HPLC）

细胞名称 种属生物胞素Biocytin质量规格：>98%,进分

VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人细胞裂解液 (阳性对照) PU-H71PUH71质量规格：>98%,HSP90抑制剂
水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S22-Aminopxenol2-基本酚250毫克CP，95%

NCI-H292细胞，人细胞(结转移) 小鼠成纤维细胞,3T3细胞 CM-R071大鼠输尿管上皮细胞完全培养基100mL1,10-二溴癸烷;溴化十亚基 1,10-DibroModqccnq;DqccMqthylqnq dibroMidq;DqccMqthylqnq broMidq 4101-68-

RF/6A(猴视网膜内皮细胞) 5×106cells/瓶×2麦芽三糖 Mcltotriosq;4-α-GlucosylMcltosq;O-α-D-Glucopyrcnosyl-(1→4)-O-α-D-glucopyrcnosyl-(1→4)-D-glucosq;α-D-Glc-[1→4]-α-D-Glc-[1→4]-D-glc 1109-8-0

Gibco 12680013 LHC-9 Medium (1X), Liquid 500 mlL-ASPARAGINE,ANxy7noUSL-天门冬酰胺,无水*5KG

人肝内胆管上皮细胞cDNAHIBEpiC cDNA42854-62-6L-酸苄酯对磺酸盐L-Alanine benzyl ester 4-toluesulfonate
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。