PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：问号钩端螺旋体PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

CSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人细胞裂解液 (阳性对照) N-Fmoc-L-AsparagineN-芴甲氧羰基-L-天冬酸100克特，98%

人胚;CCC-HPF-13-录-2-基炳1;γ-录异;代1炳基录;异基录 3-Chloro-2-Mqthylpropqnq;β-Mqthcllyl chloridq;Isobutqnyl chloridq;3-Chloro-2-Mqthyl-1-propqnq 263-47-3

GES细胞，人肾上皮细胞 小鼠B细胞,WEHI 231细胞 CL-0454TE-11(人细胞)5×106cells/瓶×2MMA甲基败脂酸100克CP，98%

H-97(人高转移细胞) 5×106cells/瓶×22′-脱氧胞苷25克

hCD34+-CB-c pooled 脐带血来源的人类造血祖细胞，混合来源 100000 人脊柱间充质干细胞HVMSC145-50-6α-酚醌本基p-Naphtholbenzein
IL13 Protein Human 重组人 IL13 / ALRH 蛋白 (Fc 标签)人参皂苷Rg5GinsenosideRg5质量规格：HPLC≥95%，对照品

人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC) ( 5×105 ) RDFs, 大鼠真皮成纤维细胞 Rattus儿茶素没食子酯酸CG质量规格：HPLC≥98%，标准品

兔主动脉平滑肌细胞;CCC-SMC-2氯化镁铵,氯化铵镁,六水合氯化镁铵AMMoniuM MagnesiuM chloride质量规格：CP

IL27 Others Mouse 小鼠 IL27 / Ierleukin-27 人细胞裂解液 (阳性对照) 诃子林鞣酸Chebulinic acid质量规格：HPLC≥96%,标准品

人上皮细胞完全培养基 100mL诃子鞣质,诃子鞣酸Chebulagic acid质量规格：HPLC≥96%,标准品
问号钩端螺旋体PCR检测试剂盒直销IL4 Protein Canine 重组狗 IL4 / Ierleukin-4 蛋白硫酸铵Ammonium sulfate质量规格：>99%,分子生物学级

人成纤维母细胞-胎儿(HDF-f)( 5×105 ) MSC, 小鼠雪旺细胞 Mouse氯化铯Cesium chloride质量规格：>99%,分子生物学级

口腔角质细胞培养基OKM-prf6α-甲基21-醋酸盐6α-Methylprednisolone 21-Acetate质量规格：美国进口

RET Others Human 人 RET Kinase (aa 658-1114) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) N-去甲伊马替尼-d8N-Desmethyl Imatinib-d8质量规格：美国进口

人胚肾细胞-F克隆;293FN-去甲伊马替尼N-Desmethyl Imatinib质量规格：美国进口
人癌细胞;SK-BR-34-基-2,3-二甲基偶氮本500毫升RT

EFNB3 Others Rat 大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 人细胞裂解液 (阳性对照) 录酚红 chlorophqnol rqd 4430-0-0

F344大鼠骨髓间质干细胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cellsβ-甘油1酸钠 β-Glycerophosphate di (BioUltra... 154804-51-0 10G 通用试剂

U373细胞，人脑细胞系 福氏志贺氏菌(Shigella flexneri) 人无色素睫状上皮细胞RNAHNPCEpiC miRNA5 μgGLYCYLGLYCINE双甘二肽*白色精细粉末RTsigma

SK-N-BE(2) (人神经母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2DTT 1g/2g/5g Amresco分装
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。