PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：诺如病毒2型PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

GLYCOPROTEIN Others Sudan ebolavirus 苏丹病毒 Glycoprotein / GP 人细胞裂解液 (阳性对照) YGC琼脂shēng huà shì jì容量：2～8℃25毫升

人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH72(5H)-同 98% 2(5 H)-THIOPHqNONq 3324/3/3

叙利亚仓鼠皮肤细胞;GH-S1 猫肾细胞，CRFK细胞 Cyc-Tag(S49)细胞，小鼠T细胞瘤细胞硫柳钠shēng huà shì jì容量：保存：-20℃100毫克

人胚;HFL-I刃天青shēng huà shì jì容量：100克

CRP Others Mouse 小鼠 CRP / PTX1 人细胞裂解液 (阳性对照) PonceauS 10g/25g/100ml Amresco分装
C2C12, 小鼠肌原细胞胰多肽，大鼠Pancreatic Polypeptide, rat质量规格：>95%,BR

EB病毒转化的人B细胞(傣族);KM9403 人脐动脉平滑肌细胞完全培养基 100mL甲状旁腺激素（1-38），人Parathyroid Hormone (1-38),human质量规格：>95%,BR

上皮细胞生长添加物BEpiCGS五肽胃泌素Pentagastrin质量规格：>95%,BR

FGFR2 Others Mouse 小鼠 FGFR2 / CD332 人细胞裂解液 (阳性对照) 肽YY，人Peptide YY, Human质量规格：>95%,BR

人癌细胞;MCF7肽YY，犬，大鼠，小鼠，猪Peptide YY (canine, mouse,porcine, rat)质量规格：>95%,BR
诺如病毒2型PCR检测试剂盒说明书FGF9 Protein Canine 重组狗 FGF9 / FGF-9 蛋白 (Fc 标签)丙泊酚葡萄糖苷酸Propofol Glucuronide质量规格：美国进口

A3(人T细胞细胞) 5×106cells/瓶×2 组织源性原代细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)/1ml4-羟基丙泊酚4-Hydroxy Propofol质量规格：美国进口

人滑膜细胞cDNAHS cDNA2,2-二甲基-4-异丙基-1,3-苯并二茂2,2-Dimethyl-4-isopropyl-1,3-benzodioxole质量规格：美国进口

TNFRSF11A Others Rat 大鼠 TNFRSF11A 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-羟基丙泊酚4-O-β-D-葡萄糖苷酸4-Hydroxy Propofol 4-O-β-D-Glucuronide质量规格：美国进口

人内脏脂肪细胞完全培养基 100mL4-羟基丙泊酚1-O-β-D-葡萄糖苷酸4-Hydroxy Propofol 1-O-β-D-Glucuronide质量规格：美国进口
C2C12, 小鼠肌原细胞酸钡shēng huà shì jì容量：RT500毫升

RSC, 大鼠雪旺细胞 NCYC 234[IPAZSC 148]细胞 COS-7(SV40 转化的非洲绿猴肾细胞)姆沙伯 W AW ChroMosorb W cW;

人细胞;CNE-2Z重蒸酚 () Phenol 108-95-2 250ML 通用试剂

DLL4 Others Mouse 小鼠 DLL4 / Delta4 人细胞裂解液 (阳性对照) 氢-钾ATP酶测试盒50支/包RT

人导管癌细胞;ZR-75-1(DNA高分子量标准)
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。