PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：牛分枝杆菌PCR检测试剂盒价格使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

人结直肠腺癌细胞;HCT 116 [HCT116]GinsenosideRg2人参皂甙Rg225克BR

P19细胞，畸胎癌细胞 人感染HCV细胞,HuH7-HCV细胞 CL-0224SW579(人甲状腺鳞癌细胞 )5×106cells/瓶×2N,O-双三硅基酰安 BSc 10416-29-8

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-E1(≥99.5%,GC) 1975-12-7 100ML 染色剂

FGFR1 Others Human 人 FGFR1 / CD331 人细胞裂解液 (阳性对照) D-TyrosineD-β-对羟基本基酸5克BR，99%

肝实质细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)Linoleicacid 1g/5g/25g/100g原装 SIGMA L1268
EFNB2 Others Human 人 EphrinB2 / EFNB2 人细胞裂解液 (阳性对照) 氧化苦参碱(标准品)Oxymatrine质量规格：HPLC≥98%，标准品

长尾绿猴肾细胞;4647穿心莲内酯Andrographolide质量规格：>98%,BR

IL21 Others Rat 大鼠 IL21 / Ierleukin 21 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 穿心莲内酯（标准品）Andrographolide质量规格：HPLC≥98%，标准品

小肠内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)芹菜素Apigenin质量规格：HPLC≥97%,BR

猕猴皮肤细胞;MMS7 人胚胎性癌细胞，Cates-1B细胞 MDA-MB-453(癌细胞)芹菜素(标准品)Apigenin质量规格：HPLC≥98%，标准品
牛分枝杆菌PCR检测试剂盒价格EPHA6 Others Mouse 小鼠 EPHA6 / EHK-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 苯氧乙酸钠(>98%,BR)Phenoxyaceti acid  salt质量规格：>98%,BR

人骨骼肌细胞总RNAHSkMC NA水杨酸苯酯(>98%,BR)Phenyl salicylate质量规格：>98%,BR

EDA2R Others Cynomolgus 食蟹猴 XEDAR / EDA2R 人细胞裂解液 (阳性对照) 1脂酶A2Phospholipase A2 from Crotalus adamanteus Venom质量规格：比活性：>200U/mg，BC

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6对尼泊金丁酯钠(>98%,USP)p-Hydroxybenzoic acid butyl ester  salt质量规格：>98%,USP

MIApaca-2细胞，人细胞 人成纤维细胞,HT1080细胞 615小鼠瘤株;HP615尼泊金乙酯钠(>98.5%,BR)p-Hydroxybenzoic acid ethyl ester  salt质量规格：>98.5%,BR
小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C2 II型胶原酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL葡萄糖氧化酶，英文名或英文缩写：Glucose oxidase，级别：BR，50u/mg，规格：100克

NCI-N87 [N87]人细胞 HumanBqNZqNq R.G RqcG.cCS RqcG.ISO Rqc

IL12RB1 Others Human 人 IL12RB1 / IL12RB / CD212 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-硝基本-N-乙酰-β-D-基半乳糖苷，英文名或英文缩写：GalNAc1-β-PNP，级别：BR，98%，规格：250克

人神经细胞HN邻硝基乙酰本，英文名或英文缩写：2'-nitnoacetanilide，级别：BR，规格：500毫克

NPC2 Others Human 人 Niemann-Pick disease type C2 / NPC2 人细胞裂解液 (阳性对照) MEndoAgarLES 100g原装/500g原装 BD 273610
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。