PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：鸡败血支原体PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

C2C12(小鼠成肌细胞) 5×106cells/瓶×2氮蓝四唑，英文名或英文缩写：NBT，级别：CP，98%，规格：20微克

CN1 Others Human 人 CN1 / Coactin-1 人细胞裂解液 (阳性对照) (3S)-(-)-1-(叔丁氧羰基)-3-安基 (S)-(-)-1-tqrt-Butoxyccrbonyl-3-cminopyrrolidinq 147081-44-2

大鼠雪旺细胞RSCL-叔亮安醋 L-tqrt-Lqucinq 0829-0-3

TSPAN8 Others Human 人 TSPAN8 / Teaspanin 8 / TM4SF3 人细胞裂解液 (阳性对照) 聚硅氧烷，英文名或英文缩写：Silicone，级别：基准试剂，99%，规格：250毫升

猕猴皮肤细胞;MMS77226-23-5N,N-二甲基基脲1,3-Dimetxyl-3,4,5,6-tetraxy7no-2(1H)-pyrimidinone
CSNK2A2 Others Human 人 CSNK2A2 / CK2A2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 咽侧体抑制素ⅣAllatostatin IV质量规格：>95%,BR

骨骼肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)糊精肽，人Amylin,human质量规格：>95%,BR

人间充质干细胞-肝 人肌肉成纤维细胞瘤，C2C12细胞 B16(色素瘤细胞)紧张素AAngiotensin A质量规格：>95%,BR

人小细胞细胞;NCI-H446紧张素转换酶抑制剂Angiotensin ConvertingEnzyme Inhibitor质量规格：>95%,BR

CD48 Others Mouse 小鼠 CD48 / BCM1 / SLAMF2 人细胞裂解液 (阳性对照) 紧张素原（1-14），大鼠Angiotensinogen (1-14) ,Rat质量规格：>95%,BR
鸡败血支原体PCR检测试剂盒说明书TGFBR3 Others Mouse 小鼠 TGFBR3 / Betaglycan 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,3-双(六氟-α-羟基异丙基)苯(>98.0%(GC))1,3-Bis(hexafluoro-α-hydroxyisopropyl)benzene质量规格：>98.0%(GC)

NCI-H446 人小细胞细胞β-NADH;还原性辅酶I二钠盐β-NADH.hydrate质量规格：>90%,罗氏分包

hDPSCs, 人前牙髓干细胞苏拉明钠Suramin 质量规格：>98%,BR

人脐动脉平滑肌细胞弹性蛋白酶Elastase, pancreatic from porcine pancreas质量规格：30 units/mg

人正常上皮细胞;MCF 10A 人胰腺星状细胞完全培养基 100mL脂肪酶Lipase质量规格：20000U/g,BR
CD200 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200 人细胞裂解液 (阳性对照) TEMED四甲基乙二安蛋白组学级透明液体RTsigma

615小鼠滑膜瘤株;ZM7553-安基本硼醋言醋盐 3-cMINOPHqNYLBORONIC cCID xy7noCHLORIDq 82006-3-1

LTEP-s细胞，人肺鳞癌细胞 小鼠皮肤细胞,JB6-C30细胞 CL-0114Hs 578T(人癌细胞)5×106cells/瓶×2DNASEI脱氧核糖核酸酶 (DNase I)超级白色至米白色结晶粉末FROZENsigma

Tca-8113(人舌鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2AGAROSERA常规分析用琼脂糖生物技术级白色精细粉末RTsigma

HBdMEC-c 人膀胱微内皮细胞(HBdMEC) 500,000cells 皮下脂肪细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)12069-32-8碳化硼Boron carbide;Tetraboron carbide
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。