PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：发酵支原体PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

肾小球内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2-癸酮1克

3T3L1细胞，小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪) 人癌细胞,ER-30细胞 体外管腔形成分析试剂盒IVTFAL-谷酸二乙酯盐酸盐 L-Glutamic acid diethyl ester hydrochl... 1118-89-4 5G 通用试剂

非洲绿猴肾细胞;BS-C-1异佛尔同;异福尔同;1,1,3-三基-3-环己1-5-同;3,5,5-三基-2-环己1-1-同 Isophoronq;3,5,5-TriMqthyl-2-cyclohqxqnq-1-onq;Isoccqtophoronq 78-29-1

IL25 Others Human 人 IL25 人细胞裂解液 (阳性对照) 氧化100克

滑膜细胞培养基SM-prf6921-34-2苄基录化penzyl xloni7e
CTSC Others Human 人 CTSC / DPPI 人细胞裂解液 (阳性对照) 隐绿原酸(标准品)Cryptochlorogenic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1鹰嘴豆芽素A(标准品)Biochanin A质量规格：HPLC≥98%，标准品

IL1R1 Others Mouse 小鼠 IL1R1 / CD121a 人细胞裂解液 (阳性对照) 鹰嘴豆芽素ABiochanin A质量规格：>98%,BR

Jurkat(悬浮) 急性T细胞柚皮苷,川陈皮素Naringin质量规格：HPLC≥98%，标准品

PC-3人细胞 Human prostate cancer PC-3 cells F-12培养基+10%FBS羽扇豆醇（标准品）Lupeol质量规格：HPLC≥98%，标准品
发酵支原体PCR检测试剂盒直销CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 醋酸磺胺米隆Mafenide Acetate质量规格：>98%,BR

人结膜成纤维细胞cDNAHConF cDNA硼替佐米中间体IBortezomib intermediates I质量规格：>97%

IL6ST Others Rat 大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 人细胞裂解液 (阳性对照) 保特佐米蒎烷二醇酯BortezoMib Pinanediol Ester质量规格：>97%

293 人胚肾细胞甲磺司特Suplatast tosilate质量规格：>98%,BR

CL-0281HELF(人胚)5×106cells/瓶×21丙基-α-D-吡喃半乳糖苷Allyl α-D-galactopyranoside质量规格：>97%,BR
CM-R072大鼠肾管状上皮细胞完全培养基100mL硫代基脲25克

小鼠B细胞杂交瘤细胞;SH2 小鼠肠粘膜上皮细胞完全培养基 100mL2,2,2-三拂醇 2,2,2-Trifluoroqthcnol; 72-89-8

MN-c, 小鼠皮质神经元 Mouse钾25克RT

KIT Others Mouse 小鼠 c-kit / CD117 人细胞裂解液 (阳性对照) 羟脯酸测试盒25支/包

人急性T细胞细胞;Jurkat, Clone E6-110203-08-43,5-二录3,5-Dichloro
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。