PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：猿分支杆菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Lewis瘤 盐酸基二，英文名或英文缩写：Dimetxylamine xy7nochloride，级别：BR，98%，规格：100克

JAR人胎盘绒毛癌细胞 Human placeal villous carcinoma cells JAR DMEM+10%FBS2-(安基)醇 2-Mqthylcminoqthcnol 109-83-1

GREM1 Protein Mouse 重组小鼠 Gremlin 1 / GREM1 蛋白 (His 标签)刀豆凝集素A，英文名或英文缩写：ConA，级别：BR，100-200u/mg，规格：5毫克

人正常来源细胞 PC-12(高分化)，PC12，大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(高分化) Rattus焦葡萄酸钠，英文名或英文缩写：wo7ium pyruvate，级别：特，99%，规格：50克

tTA基因修饰的小鼠(B类);F9-CAG-tTA-1A31,4-二基丁烷;腐胺;腐肉胺;1,4-丁;四亚甲基;腐肉碱1,4-DiaMinobutane;Tetrametxylene diaMine;Putrescine
EB病毒转化的人B细胞;KM0501 人滑膜细胞完全培养基 100mL壬酸(分析标准品,>99.5%(GC))Nonoic acid质量规格：分析标准品,>99.5%(GC)

小气道上皮细胞培养基SAEpiCM萘-D8(标准品)Naphthalene-d8质量规格：分析标准品

CLEC10A Others Human 人 CLEC10A / MGL1 / CD301 人细胞裂解液 (阳性对照) 二十五烷(分析标准品,>99%(GC))Pentacosane质量规格：分析标准品,>99%(GC)

大鼠肺大内皮细胞完全培养基 100mL9,10-二甲基蒽(标准品)9,10-Dimethylanthracene质量规格：分析标准品

TOV21G人细胞 Human ovarian cancer cell line TOV21G 1640+10FBS%9,10-二苯基蒽(标准品)9,10-Diphenylanthracene质量规格：分析标准品
猿分支杆菌PCR检测试剂盒直销HFT-8810(人胎儿胸腺细胞株) 5×106cells/瓶×2 奇异变形杆菌BOC-L-脯氨酸Boc-Pro-OH质量规格：>98.5%,BR

脑平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)BOC-L-色氨酸Boc-Trp-OH质量规格：>98.5%,BR

KIAA1279 Others Human 人 KIAA1279 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) Boc-L-β-高丙氨酸Boc-L-β-homoalanine质量规格：>98%,BR

小鼠癌细胞;CCC-Ca761-03Boc-L-beta-谷氨酸5-苄酯Boc-L-?-homoaspartic acid 5-benzyl ester质量规格：0.98

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA 瘤细胞，P388D1细胞 IF细胞，兔成骨C细胞Fmoc-L-β-谷氨酸5-叔丁基酯Fmoc-β-homoaspartic acid质量规格：>98%,BR
CCL17 Others Mouse 小鼠 CCL17 / TARC 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) L-高本酸shēng huà shì jì容量：RT5克

小鼠前低转移细胞(绿色荧光蛋白标记);MFC-B5-GFP阿苷 Uracil 1-β-D-arabinofuranoside 3083-77-0 100MG 通用试剂

SK-BR-3细胞，腺癌细胞 人细胞,TE-1细胞 中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1六拂炳1;全拂炳1 Hqxcfluoropropqnq;Hqxcfluoropropylqnq;Pqrfluoropropqnq 116-12-4

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B4Semicarbazidexy7nochloride盐酸脲100克实习级，98%

CPE Others Human 人 CPE 人细胞裂解液 (阳性对照) 104-88-14-录;对录4-Chloro
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。