副结核分支杆菌PCR检测试剂盒说明书【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

【产品名称】: 副结核分支杆菌PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Mycobacterium paratuberculosisPCR
【货号】: BKP4034
组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

副结核分支杆菌PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

人肾透明细胞癌;Caki-1SaikosaponinB1柴胡皂甙B1100克BR，粘度200 mpe.s

NK-92细胞，人恶性非霍奇金瘤患者的自然杀伤细胞 人细胞系,Hep-3B细胞 CL-0184PANC-1(人细胞)5×106cells/瓶×2N.N-二基-1.3-炳二安 3-Diqthylcminopropylcminq 104-78-9

中国仓鼠卵巢细胞;CTLA4 Ig-24ProcyanidinB2原矢车菊素B2500ulAR，99%

SLAMF1 Others Human 人 CD150 人细胞裂解液 (阳性对照) 甲基绿shēng huà shì jì容量：1公斤

平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)98-67-9固化剂4-xy7noxybenzenesulfonic acid
EB病毒转化的人B细胞;KM9801 人脉络膜细胞完全培养基 100mL紫花前胡苷（标准品）Nodakenin质量规格：HPLC≥98%，标准品

滋养层细胞培养基TM-prf紫蓳灵（标准品）Corynoline质量规格：HPLC≥98%，标准品

EPO Others Mouse 小鼠 Erythropoietin / EPO 人细胞裂解液 (阳性对照) 紫云英苷（标准品）Astragaline质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠上皮细胞完全培养基 100mL棕榈酸（标准品）Palmitic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品

CV-1细胞，非洲绿猴肾细胞 HPAC(人细胞) CM-H010人小气道上皮细胞完全培养基100mL王不留行黄酮苷（标准品）Vaccarin质量规格：HPLC≥98%，标准品
Hepa 1-6(小鼠细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0458U-118 MG(人脑星形胶质母细胞瘤)5×106cells/瓶×2 人胎儿胸腺细胞株;HFT-8810 [HFT8810]地塞米,氟美（标准品）Dexamethasone质量规格：HPLC>98%,标准品

人卵巢;PA-1盐酸地尔硫卓Diltiazem HCL 质量规格：>98%,BR

NCAM1 Others Rat 大鼠 NCAM1 / CD56 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸地尔硫卓(标准品)Diltiazem HCL 质量规格：含量测定，标准品

CL-0433RWPE-2(人正常细胞)5×106cells/瓶×2地美司钠Dimesna 质量规格：美国进口

SL-7细胞，胚肺细胞 人上皮细胞,RWPE2细胞 人上皮细胞;MCF-10A甲磺酸多拉司琼Dolasetron mesylate 质量规格：>98.5%,BR
副结核分支杆菌PCR检测试剂盒说明书HPMEC-c 人肺微内皮细胞(HPMEC) 500,000cells 脑动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)3-去氮腺嘌呤质量规格：美国原装进口，97%3-Deazaneplanocin A HCl salt

神经元生长添加物NGS4-氧代维甲酰酚胺质量规格：美国原装进口3-Keto Fenretinide

CA9 Others Canine 狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-表米诺环素质量规格：美国原装进口4-Epi Minocycline

大鼠气管平滑肌细胞完全培养基 100mL牛磺脱氧胆酸钠质量规格：>97%,BRTaurodeoxycholic acid  salt

F81细胞，猫肾细胞 NCI-H838 [H838](人细胞) 散鳞镜鲤尾鳍细胞;YZ21rU亚1酰胺单体质量规格：>98%,BRrU Phosphoramidite

PCR检测试剂盒

 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。