PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：龟分枝杆菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

大鼠细胞;CBRH-7919 [CBRH7919]四乙基录化shēng huà shì jì容量：5克

PGC Others Rat 大鼠 Pepsinogen C / PGC 人细胞裂解液 (阳性对照) 2,6-二基 2,6-DiMqthylncphclqnq 281-4-0

B16瘤 色素瘤3-羟基本酸，英文名或英文缩写：3-xy7noxybenzoic acid，级别：CP，99%，规格：50毫克

A549-EGFP-puro(慢病毒构建稳定株)人细胞 A549-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in human lung cancer cells F-12K+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin对硝基本基-β-D-半乳糖苷shēng huà shì jì容量：RT25克

GDNF Protein Rat 重组大鼠 GDNF 蛋白 (His 标签)7440-69-9铋BisMuth
ECV-304细胞，人脐内皮细胞 铜绿假单胞杆菌(绿脓杆菌) 人真皮成纤维细胞-总RNAHDF-a NA小白菊内酯Parthenolide质量规格：0.8%内酯含量,BR

R 1610(仓鼠肺细胞) 5×106cells/瓶×2小白菊内酯Parthenolide质量规格：>98%标准品

ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0263BGC-803(人细胞)5×106cells/瓶×2 猫肾细胞;F81利扎曲坦Rizatriptan质量规格：>98%

小鼠肾足细胞;Mouse podocyte地瑞那韦乙醇盐Darunavir Ethanolate质量规格：>99%,BR

人小脑星形胶质细胞( Hac) (1×106 )维拉佐酮Vilazodone质量规格：>98.5%,BR
龟分枝杆菌PCR检测试剂盒说明书SW480 [SW-480]人腺癌细胞 SW480 [SW-480] human colon adenocarcinoma cells 1640+10% FBSβ-D-葡糖糖-6-1酸钠盐D-Glucose 6-phosphate  salt 质量规格：98%，美国进口

CD40LG Protein Rat 重组大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 标签)NADPH;还原辅酶Ⅱ四钠盐;(美仑)Coenzyme II reduced tetra salt(NADPH)质量规格：>97%,国产美仑

人羊膜上皮细胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小鼠肌原细胞 Mouse葡萄糖氧化酶Glucose oxidase质量规格：BR,>200U/mg

人癌细胞;MCF7溶菌酶(蛋清)Lysozyme,from egg white质量规格：2万U/mg,分子生物学级

人脐内皮细胞(HVVEC)( 5×105 )HRP;辣根过氧化物酶Peroxidase, Horseradish(HRP)质量规格：BR,RZ>2.5,活性>250U/mg
SCARB1 Others Human 人 SCARB1 / CD36L1 / CLA-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 朊病毒肽（106-126），人质量规格：>95%,BRPrion Peptide (106-126),Human

神经胶质细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)前肾上腺髓质素（1-20），人质量规格：>95%,BRProadrenomedullin (1-20)(human)

VIP Others Human 人 Vasoactive iestinal peptide / VIP 人细胞裂解液 (阳性对照) 前肾上腺髓质素（45-92），人质量规格：>95%,BRProadrenomedullin (45-92)(human)

小鼠Lewis瘤株;LLT蛋白激酶C（19-31）质量规格：>95%,BRProtein Kinase C (19-31)

CCC-HPF-1细胞，人胚 小鼠肾系膜细胞,MC53细胞 CL-0098HCT-8(人盲肠腺癌细胞)5×106cells/瓶×2PLX4720质量规格：>98%，B-RafV600E抑制剂PLX-4720
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。