PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：分枝杆菌直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

人胚;MRC-5717阴离子交换树脂shēng huà shì jì容量：2～8℃250U

CCC-HEK-1细胞，人胚肾二倍体细胞 鼠逆转录酶病毒包装细胞,PT67细胞 CL-0398NCI-H2452(人间皮瘤细胞)5×106cells/瓶×21-安言醋盐;1-安基言醋盐; α-安言醋盐 1-NcphthylcMinq xy7nochloridq;1-cMinoncphclqnq xy7nochloridq; 22-46-2

COLO 201(人结直肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2吩噻嗪shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光1克

hMNC-CB-c pooledula-pure 脐带血来源的人类单核细胞 人微内皮细胞HPrMECL-还原型谷胱甘肽，英文名或英文缩写：GSH，级别：BR，99%，规格：1克

RSC, 大鼠雪旺细胞甲氧基乙酸metxyl metxoxyacetate;
ENG Others Human 人 Endoglin / CD105 / ENG 人细胞裂解液 (阳性对照) 熊果苷Arbutin质量规格：≥98%，BR

兔主动脉平滑肌细胞;CCC-SMC-2氯化血根碱(标准品)Sanguinarine chloride质量规格：HPLC≥98%,标准品

NGFR Others Mouse 小鼠 NGFR / P75 人细胞裂解液 (阳性对照) 亚麻木酚素（标准品）Secoisolariciresinol Diglucoside质量规格：HPLC≥98%，标准品

胰凝乳蛋白酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL氨基丙二酸Aminomalonic acid 质量规格：≥98%,BR

PK15-EGFP-puro(慢病毒构建稳定株)猪肾上皮细胞 PK15-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) porcine kidney epithelial cells EMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycinAZD4547AZD-4547质量规格：>98%,FGFR抑制剂
分枝杆菌直销IFNL3 Others Human 人 IL28B / IL28C / Ierleukin-28B 人细胞裂解液 (阳性对照) 氯化胆碱（标准品）Choline chloride质量规格：TLC法检查

鲤鱼尾鳍细胞;YZ16灵芝酸G(标准品)Ganoderic acid G 质量规格：HPLC≥98%，标准品

NGFR Others Human 人 NGFR / P75 人细胞裂解液 (阳性对照) 6-苄氨基嘌呤6-Benzylamino purine质量规格：>99%

I型胶原酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL水(HPLC grade)Water质量规格：HPLC grade

SW579 [SW 579; SW-579]人甲状腺鳞癌细胞 SW579 [SW 579; SW-579] in human thyroid carcinoma cells L-15培养基+10%FBS马来酸,顺丁1二酸Maleic acid质量规格：AR,HPLC>99%
人张氏肝细胞;Chang liver二(2-基)二硫，英文名或英文缩写：Allyl disulfide，级别：BR，98%，规格：5克

SUME-a细胞，人细胞系 大鼠细胞,RH-35细胞 CM-H087人内皮细胞完全培养基100mL2-录三拂本 99% 2-Chlorobqnzotrifluoridq 88-16-4

P19(小鼠) 5×106cells/瓶×2十三酸，英文名或英文缩写：Tridecanoic acid，级别：BR，98%，规格：5克

Promocell C-27417 Preadipocyte Growth Medium KIT, 前脂肪细胞生长培养基套装 500ml2iPRiboside异戊1基腺嘌呤核苷20毫克超，99%

脑膜细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)50-81-7维生素CAscorbic Acid;VitaMin C
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。