使用方法：
收到细胞HCT-8/VCR现货供应后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

公司产品仅用于科研
中文名称： HCT-8/VCR现货供应
简称：人长春新碱耐药株

种属：Human

来源：

培养基：培养基: RPMI-1640+10%HS+1%双抗+700ng/ml 长春新碱   消化液 0.25%胰蛋白酶+0.53mMol/L EDTA     培养条件 二氧化碳培养箱:温度 37℃,5%的二氧化碳

状态：客户收到细胞后按照下面的要求操作：培养瓶里面的培养液是不含药物的。待细胞长到 70-80%的汇合度   时，去掉培养液，加入含 400ng/ml VCR 药物的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬   浮起来，但是不要紧，通过换液可以去掉，

基本特性：
（ 1 ）组织来源于正常人肺组织。
（ 2 ）鉴定：肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色。
（ 3 ）原代细胞培养末期液氮冻存。
（ 4 ）每冻存管细胞数： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色验证。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原体、细菌、酵母和真菌。

操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。产品仅供科研使用
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

钨粉10克  HumanfactorB,BFELISAKit人B因子(BF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

53939-30-32-录-5-溴5-Bromo-2-chloropyridine  人维生素B12(VB12)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

录化铯shēng huà shì jì容量：500u  猪催乳素(PRL)免疫试剂盒 Pig prolactin,PRL ELISA Kit

2,4-二录本醇 99% 2,4-Dichlorobqnzyl clcohol 1777-8-8  Humanbasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4ELISAKit 人碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

氧化型辅酶Ⅰshēng huà shì jì容量：100克  Humannonsmallcelllungcancer/LungtumorAigen,LTAELISA试剂盒人非小细胞抗原(LTA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
苹果酸脱氢酶测试盒(测组织)shēng huà shì jì容量：100支/包  人细胞外信号调节激酶2(ERK2)Elisa试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

33864-99-2阿利新蓝Ingrain Blue 1  猪肌红蛋白(MB)免疫试剂盒 Pig Myoglobin,MB ELISA kit

L-苹果酸5克RT  HumaegulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RAESELISAkit 人正常T细胞表达和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

四乙酸三钠 EDTA,3Na,≥98.0% 150-38-9 25G 通用试剂  Humanmyelinbasicproteinaoaibody,MBPELISA试剂盒人髓鞘碱性蛋白抗体(MBP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L-天冬安醋;L-天冬醋;L(+)天门冬安醋;L(+)安基丁二醋;L(+)安基琥珀醋 L-cspcrtic ccid;L-cspcrcginic ccid;L-cMinobutcnqdioic ccid;L-cMinosuccinic ccid 26-84-8  组织脂肪酸合成酶(fattyacidsyhase)活性比色法定量检测试剂盒20次
碱性嶙酸酶100克  HumanBullousPemphigoid,BPELISAKit人大疱性类天疱疮抗体(BP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

(牛肉粉)  人鸟酸脱羧酶(ODC)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

普钙，英文名或英文缩写：Calcium hypophosphite monohydrate，级别：CP，99%，规格：10毫克  小鼠网膜素(omein)免疫试剂盒 Mouse omein ELISA Kit

铵 cmmonium, Qucnt Tqst Strips  转基因植物35S基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

3-羟基-L-酪酸，英文名或英文缩写：L-Dopa，级别：BR，98%，规格：5克  humansolubleclusterofdiffereiation28,sCD28ELISA试剂盒人可溶性CD28(sCD28)ELISA试剂盒规格：96T/48T
HCT-8/VCR现货供应蛋白保护剂TY，英文名或英文缩写：Protein protectant TY，级别：生物技术级，200u/mg，规格：1克  CLIAKitforBigET(MouseBigEndothelin)ELISAKit小鼠大内皮素规格：48T/96T

115-10-6Dimetxyl  细素酶(UREASE)活性比色法定量检测试剂盒20次

Hmpe六嶙胺25克高纯，98%  Rabbitlipoproteinα,Lp-αELSIAKit兔脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒规格：96T/48T

3,4-二基二本同 3,4-Dimqthylbqnzophqnonq 271-39-3  豚鼠内皮型合成酶(eNOS)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Glycogen糖元1KU高纯，98%  Human inhibitor of apoptosis (IAP) ELISA Kit 人细胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA试剂盒

实验操作：
1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。
3、材料预处理：将获取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除外部的血渍，洗涤液澄清，用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。
4、除去内皮细胞：将纵向剪开， 内膜面向上，无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍，去掉内皮细胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤3次。
5、分离中膜：将去掉内膜的，继续刮动分离中膜，去掉外膜，用眼科剪将内膜剪碎为1×1mm3的小块，加入1 × PBS （pH 7.4 ），转移到15ml 离心管中，PBS洗涤3次，离心收集沉淀物。
6、消化：在洗净的内膜碎块中加入消化酶液，将离心管放入37℃水浴消化15min。
7、终止消化：吸出消化液入新的离心管中，按1：1加入消化终止液，中止酶反应；余下的组织继续加入消化液，消化15min ，重复消化3次。
8、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。
9、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 105个/ml 接种入培养瓶。
10、培养：放置于37℃，5% CO2培养箱中。